如题所述
第1个回答 2012-12-04
如果柱子白了,就是需要再生充镍了。如果还是蓝的,可能吸附了太多杂蛋白,需要彻底洗一洗;也可能蛋白样品有问题,浓度、pH、离子等等。追问
我每次都用新主子,蛋白在缓冲热溶解性不高,考虑等电点的问题了,调高了缓冲液的ph,但是还是不行,
追答我都是用pH8的。你做的是变性还是非变性蛋白?你的具体操作程序是什么?是否测定过上柱、洗脱的条件?
本回答被网友采纳第2个回答 2012-12-14
有这么几个可能
1、你western检测的到目标蛋白的标签吗?如果你的目标蛋白折叠的时候将你的HIS标签包裹进了蛋白内,HIS抗体是检测不到的。因此,即使你表达出来目标蛋白,没有标签怎样能挂上呢?
2、你的WASHBUFFER即洗杂蛋白的的咪唑浓度过高,将目的蛋白冲洗了下去,待你洗脱的时候发现什么都没有挂上了。本回答被提问者采纳
1、你western检测的到目标蛋白的标签吗?如果你的目标蛋白折叠的时候将你的HIS标签包裹进了蛋白内,HIS抗体是检测不到的。因此,即使你表达出来目标蛋白,没有标签怎样能挂上呢?
2、你的WASHBUFFER即洗杂蛋白的的咪唑浓度过高,将目的蛋白冲洗了下去,待你洗脱的时候发现什么都没有挂上了。本回答被提问者采纳