His-taq纯化蛋白不挂柱子，可能的问题是什么？求高人指点。

如果柱子白了，就是需要再生充镍了。如果还是蓝的，可能吸附了太多杂蛋白，需要彻底洗一洗；也可能蛋白样品有问题，浓度、pH、离子等等。追问

我每次都用新主子，蛋白在缓冲热溶解性不高，考虑等电点的问题了，调高了缓冲液的ph，但是还是不行，

追答

我都是用pH8的。你做的是变性还是非变性蛋白？你的具体操作程序是什么？是否测定过上柱、洗脱的条件？

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有这么几个可能
1、你western检测的到目标蛋白的标签吗？如果你的目标蛋白折叠的时候将你的HIS标签包裹进了蛋白内，HIS抗体是检测不到的。因此，即使你表达出来目标蛋白，没有标签怎样能挂上呢？
2、你的WASHBUFFER即洗杂蛋白的的咪唑浓度过高，将目的蛋白冲洗了下去，待你洗脱的时候发现什么都没有挂上了。本回答被提问者采纳