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原核蛋白表达如何成功
基因工程的一道论述题,关于克隆
表达
体内
蛋白质
。
答:
连接 将目的片段和
原核表达
载体分别酶切处理,回收酶切片段。通过连接酶连接。转化 讲构建好的表达载体转化细菌,涂布在特定抗性的平板上。阳性克隆的筛选、鉴定 挑取阳性克隆,通过菌落PCR鉴定是否为阳性。目的
蛋白
的表达 将经过验证的阳性克隆扩大培养,即
成功
在细菌内表达了人体蛋白。望采纳 ...
...测序准确,转至BL21
原核表达蛋白
,,
怎么
也诱导不出来?同批次的BL21...
答:
1 可能是太弱你看不出来,建议用His抗体做个western 看看是不是有条带而看不出。2 是不是融解性太差,建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体
原核表达
后
如何
验证
蛋白质
是正确的呢
答:
1,如果
蛋白
是分泌
表达
,直接分离上清(传统的方法:离心去细胞和细胞碎片→过滤(0.45或0.22nm)→蛋白纯化(蛋白纯化是一个很复杂的过程,这里一笔带过了,电泳,层析,沉淀等方法)→获得目的蛋白 2,胞内蛋白,首先裂解细胞(这样细胞内的杂蛋白。
急用!一论述题:
如何
克隆一个功能性基因,如何在
原核
系统中高效
表达
?
答:
⑴通过
表达
载体将外源基因导入宿主菌,并指导宿主菌的酶系统合成外源
蛋白
;⑵外源基因不能带有内含子,因而必须用 cDNA 或全化学合成基因,而不能用基因组 DNA;⑶必须利用
原核
细胞的强启动子和 SD序列等调控元件控制外源基因的表达;⑷外源基因与表达载体连接后,必须形成正确的开放阅读框架(open reading...
大家
原核表达
出一个基因的
蛋白
后,可以继续做哪些
答:
大家
原核表达
出一个基因的蛋白后,可以继续做哪些 1、Operon操纵子:一个或几个结构基因与一个调节基因和一个操纵基因,加上启动子构成一个操纵单元,这个单元称为操纵子。在操纵子中,结构基因产生mRNA并作为模板合成
蛋白质
;而调节基因则产生一种阻遏蛋白与操纵基因相互作用;阻遏蛋白与操纵基因结合从而...
...为什么无法在
原核
生物中
表达
出具有活性的
蛋白质
产物?这是一道遗传...
答:
你好,真核生物的DNA中有内含子和外显子,在真核生物中的
蛋白质表达
时,有高尔基体,内质网这些细胞器进行加工,将基因中内含子表达出的肽链部分剪切掉,外显子表达的肽链部分连接起来,这就是所谓有活性蛋白质的一级结构,通过折叠在形成有活性的一定空间结构的蛋白质。而
原核
生物基因中没有内含子和外...
做
蛋白
的
原核表达
时为什么总是不稳定,明明上次已经有表达了,现在又老做...
答:
这个很正常,我也碰到过,有时候是找不出原因的,只能再转化,设置重新开始,筛选稳定的了。
真核表达载体的特点,
原核表达
载体的特点
答:
原核表达
一般周期短,但
蛋白
的活性不能确定 真核表达经过糖基化,磷酸化,和目的蛋白相似性高,周期要长,往往有的还有养细胞
原核表达
的意义
答:
问题二:真核基因
表达
调控意义是什么? 真核基因组比
原核
大得多,结构更复杂,含有许多重复序列,基因组的大部分序列不是为
蛋白质
编码的,而为蛋白质编码的基因绝大多数是不连续的。真核生物基本上是采取逐个基因调控表达的形式。真核基因表达调控的环节更多,转录前可以有基因的扩增或重排,并涉及染色质结构的改变、基因...
检测
原核表达蛋白
没有需要将菌体超声波破碎吗
答:
检测
原核表达
蛋白不需要将菌体超声波破碎的,原因如下:1、如果是仅仅检测
原核蛋白
是否有表达,可以直接将菌体重悬于蒸馏水中,并使用SDS-PAGE的方法检测。2、如果需要检测原核蛋白是否有可溶表达,则需要将菌体超声波破碎之后再检测是否有可溶表达。3、所以检测原核表达蛋白不需要将菌体超声波破碎的。超声...
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