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原核表达目的蛋白的基本原理
原核表达蛋白
与原材料提取蛋白相比有何优缺点
答:
原核表达
蛋白与原材料提取蛋白相比优缺点:优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物,而且所需的成本相对比较低廉。缺点:如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控,有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用,过量表达可能导致非生理反应,
目的蛋白
常以包涵体形式表达,导致产物纯化困难;...
为什么真核基因在
原核
细胞中
表达
出来的
蛋白质
常常失去活性
答:
1.真核基因多含有内含子,在
原核
细胞内,无法将内含子剪掉.合成的
蛋白质
就就不是正确的氨基酸序列,也无法折叠形成正确的空间结构(高级结构).而正确的空间结构是维持蛋白质生物学活性必不可少的.变性的蛋白质,之所以失去生物学活性,就是因为空间结构遭到破坏.2.蛋白质在内质网上的核糖体合成后,都有一...
外源基因在
原核
细胞中
表达
时
蛋白质的
存在形式有哪些?
答:
当外源基因在
原核
细胞中
表达
时,
蛋白质的
存在形式主要包括:1. 游离蛋白质(Free proteins):外源基因被转录和翻译后,产生的蛋白质可以以游离的形式存在于细胞质中。这些蛋白质可以执行其特定的功能,例如催化化学反应、结合DNA或其他分子等。2. 融合蛋白质(Fusion proteins):有时,在外源基因表达时...
为什么真核基因在
原核
细胞中
表达
出来的
蛋白质
常常失去活性
答:
1.真核基因多含有内含子,在
原核
细胞内,无法将内含子剪掉。合成的
蛋白质
就就不是正确的氨基酸序列,也无法折叠形成正确的空间结构(高级结构)。而正确的空间结构是维持蛋白质生物学活性必不可少的。变性的蛋白质,之所以失去生物学活性,就是因为空间结构遭到破坏。2.蛋白质在内质网上的核糖体合成后,...
利用
原核表达
系统所产生的某些真核
蛋白
通常不具有生物学活性的原因
答:
原核
生物的
蛋白质
生物合成 氨基酸在核糖体上缩合成多肽链是通过核糖体循环而实现的。此循环可分为肽链合成的起始(intiation),肽链的延伸(elongation)和肽链合成的终止(termination)三个主要过程。原核细胞的蛋白质合成过程以E.coli细胞为例。肽链合成的起始 1.三元复合物(trimer complex)的形成核糖体30S...
原核表达的
意义
答:
问题二:真核基因表达调控意义是什么? 真核基因组比
原核
大得多,结构更复杂,含有许多重复序列,基因组的大部分序列不是为
蛋白质
编码的,而为蛋白质编码的基因绝大多数是不连续的。真核生物
基本
上是采取逐个基因调控
表达的
形式。真核基因表达调控的环节更多,转录前可以有基因的扩增或重排,并涉及染色质结构的改变、基因...
基因工程
表达
出的
蛋白质
怎么鉴定
答:
用相应的抗体(对抗进行同位素标记)进行抗原——抗体杂交;如果出现杂交带,表明
目的
基因已形成
蛋白质
产品。
为什么真核生物中
蛋白质
合成的速度是
原核
生物中蛋白质合成速度的...
答:
真核的生物中合成
蛋白质
需要这么几步:1.DNA转录成hnRNA(未成熟的RNA)2.hnRNA经过修剪,去掉原来DNA上内含子转录的部分,变成mRNA 3.mRNA出核后与核糖体结合,翻译出蛋白质。而
原核
就不需要这么麻烦,转录和翻译在同一时空,边转录边翻译,一个DNA可以同时转录好几条mRNA,一条mRNA又可以同时挂有好...
为什么有些在
原核
细胞中
表达的
真核
蛋白
没有生物活性
答:
原核
生物没有真核加工
目的蛋白的
酶(切去内含肽,信号肽)或分子伴侣,及修饰(如糖基化)等,蛋白质必须有正确构象才有活性,原核生物只是
表达
出前体。
为什么要让真核生物的基因在
原核
生物中
表达
并纯化
蛋白
呢?
答:
实际上真核生物的蛋白也可以用真核细胞
蛋白表达
系统来实现,而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化的蛋白性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。
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