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双酶切的目的
本实验为什么选择
双酶切
?双酶切该注意什么?
答:
本实验选择双酶切能保证酶的有效切割
,双酶切该注意酶切顺序。在双酶切载体时2个酶切位点靠得很近,必须注意酶切顺序。有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别序列两端有多个碱基的,则必须先切,否则就可能造成酶切失败。
为什么要对重组质粒DNA进行
双酶切
答:
双酶切就是为了验证是否有目的基因
,如果双酶切条带正确,而且PCR也没有问题,就可以确定质粒构建成功。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段...
基因工程中为什么用两种
酶切
质粒和带有
目的
基因的dna片段?用一种酶切...
答:
用两种酶是为了得到链状的目的基因
,一般是不用一种酶的,比如一种限制性内切酶可以得到 ---TA 的末端,因为DNA是双链,那么目的DNA的两端就可以形成互补(这里由于版面的关系我就不表示出来了,你自己简单的画个示意图就明白),产生一个环状的DNA分子,就很难用于研究了。在具体实验中还有其他的一些...
质粒或
目的
基因什么时候用同一种
酶
,什么时候用两种?
答:
双酶切就是用两种酶切割目的基因和质粒,这样质粒和目的基因的粘性末端是不同的,
可以防止自身环化情况的出现
。
为什么要两种
酶
才能切割基因(两端要不同的限制酶),不能是同一种吗...
答:
用不同限制酶切割的目的是:保证目的基因和质粒(运载体)的准确连接,避免无效连接过多
。可以用不同限制酶切割相同序列的原理:虽然一种限制酶只能识别一种特定的氨基酸序列,但两种限制酶识别的序列可以相包含,例:酶A识别GGATCC序列,酶B识别GATC序列,则GGATCC序列就可以被两种限制酶切割。同步双酶切 ...
设计Ecor I和BamH I
双酶切的目的
是什么
答:
是为了切出合适的粘性末端进行下一步的连接。将载体和
目的
基因用同样的酶进行
酶切
后,留出相同粘性末端进行连接
酶切技术
双酶切
答:
NEB公司为每种酶都提供了配套的优化NEBuffer,这确保了100%的酶活性。缓冲液的配方以及内
切酶
在不同条件下的活性,可以在《内切酶在不同缓冲液里的活性表》和各酶的说明书里找到。选择能最大程度保持两种酶活性的缓冲液进行
双酶切
,如果非最优条件影响切割速率,可以根据具体酶的活性调整酶量和反应时...
重组质粒后为什么还需要
双酶切
,PCR鉴定并测序分析
答:
重组质粒是把载体质粒
酶切
开,连接上PCR片段,然后转化感受态细胞,培养后提质粒获得的,这一系列过程中都无法检测
目的
基因是否连接成功了,是否转化成功了,只有对转化后的菌再次提质粒、酶切检测或PCR检测才能确定前边的步骤是否成功。测序是更准确的方法,一般不用而已。
提质粒的目的是什么?
酶切的目的
是什么?
答:
提质粒的目的是去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。
酶切的目的
是对粘末端的DNA分子和载体分子进行切割,以获得相应的粘末端连接。酶切可以是单酶切也可以是
双酶切
。
请大侠赐教:什么时候用单酶切,什么时候用
双酶切
答:
单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变
双酶切
用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端和你
的目的
基因带有互补的黏性末端(当然目的基因也要用这两种酶切才行),在T4DNA连接酶...
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