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双酶切目的条带过大
为什么PCR胶回收产物
条带
大小差不多,到时
双酶切
后条带变大了
答:
PCR产物是双链线性分子,不存在质粒的三种形态。
双酶切
后分子形态保持一致,更不会自连。不知道你跑胶的时候是否点了酶切之前的产物做对照,如果没有,可能是胶浓度的问题,导致
条带
看上去大小不一。
请问质粒
双酶切
时得到的
目的条带
较大是什么原因?
答:
内切酶可能与DNA片段结合,造成条带凝胶迁移率改变
。你可以在电泳前65℃加热10min,或者采用加有SDS的loading dye加样。这样可以消除迁移率变小的问题。
为什么质粒
双酶切
后显得更大了?
答:
应该会多出一
条带
,这条带应该是跑得最慢的,也就是显得比原来的更大。
酶切
的不彻底的话,原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看到的应该是超螺旋,所以显的比较小:)zbq-92(站内联系TA)超螺旋的跑的最快,其次是线性的DNA,最后跑的最慢的是带缺口(即开环)的。用碱...
质粒
双酶切
的后
目的
片段怎么变大了
答:
首先从基因序列着手检查酶切位点是否正确;检查酶切实验,确认反应条件、缓冲溶液使用正确,不存在非特异性切割。前提是确定
双酶切
后载体骨架片段大小正确,
条带
亮度基本符合比例。分析载体与基因片段上的某处是否有共同酶切位点,再通过载体上的通用引物对重组质粒进行PCR验证。可以用两种酶对重组质粒和空载...
连接到T载体上面后,做
双酶切
,
条带
不正确,
目的
片段变大是什么原因
答:
用的是T-simple吗?如果不是simple载体,有可能切开的不是你引入的的没切位点,而是载体本身的
比如
目的
片段2千多
酶切
一般都会出现三个
条带
吗
答:
多酶切一般都会出现三个
条带
。
双酶切
质粒跑电泳出现三条带是正常现象。纯一点浓度高一点的跑胶出来就是三条带,分别是闭合、开环、线性的质粒。
质粒
酶切
后为什么会出现几
条带
?
答:
如果是单酶切,超螺旋质粒会变成开链DNA,开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋质粒,因此
条带
会偏大,这是酶切充分的情况。如果不充分,就会有大小有差距的几条带;如果是
双酶切
,而且片段大小适中,可以看见酶切的片段和载体,还有未切开的质粒。能不能区分超螺旋质粒和开链质粒,和所用琼脂糖...
酶切
产物电泳图长
条带
和半圆形条带的区别
答:
酶切产物电泳图长
条带
和半圆形条带的区别:含义不同,性质不同。1、性质不同:如果是单酶切,超螺旋质粒会变成开链DNA,开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋质粒,因此条带会偏大,这是酶切充分的情况。如果不充分,就会有大小有差距的几条带;如果是
双酶切
,而且片段大小适中,可以看见酶切的...
...才56bp,我做的琼脂糖电泳图
目的条带
看不到,这么小能不能看到呢?_百...
答:
切出来的带就是56bp也是可以看到的,比如一般的引物二聚体不过就30bp左右也可以看得很清楚,如果电泳没有看到,那是
酶切
没有成功、或者效率太低(不足以做后续的连接反应)。
质粒
双酶切
答:
质粒
酶切
后,和没有酶切的对照相比。应该会多出一
条带
,这条带应该是跑得最慢的,也就是显得比原来的更大。酶切的不彻底的话,原来的那几条带也可能存在wjswj(站内联系TA)酶切之前你看到的应该是超螺旋,所以显的比较小:)zbq-92(站内联系TA)超螺旋的跑的最快,其次是线性的DNA,最后跑的...
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