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基因真核表达载体的构建过程
人乳腺癌细胞
基因真核表达载体的构建
答:
方法 采用RT-PCR技术从高表达HYAL1的人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中扩增透明质酸酶HYLAL1
基因
,并将其插入
真核表达载体
pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,
构建
的重组表达质粒经脂质体介导转染HYAL1基因低表达的乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞。结果 用RT-PCR成功地扩增出1条1332bp的DNA片段,经限制性内切酶酶切...
简述转
基因的
基本
流程
答:
1. 基因表达载体的构建旨在使目的基因在受体细胞中稳定存在并表达
。2. 载体由目的基因、启动子、终止子和标记基因组成。启动子是RNA聚合酶识别的部位,终止子位于基因尾端,标记基因用于筛选含有目的基因的细胞。第三步:导入目的基因至受体细胞 1. 转化是目的基因进入受体细胞并稳定表达的过程。2. 导入...
如何
构建载体
答:
载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去
。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。具体过程详解如下图所示:
如何
构建
一个
基因的
过
表达载体
?是要
真核表达的
答:
基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心
。 将目的基因与运载体结合的过程,实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体, 首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同 一种限制酶切断目的基因,使其产生...
请教一下
基因表达载体构建
的原理和操作
步骤
答:
大概
步骤
:1)从
基因
组或cDNA上克隆得到完整的目的基因(至少包含CDS区),通常在两端加粘性末端或重组位点 2)选择合适的
表达载体
(
真核
、原核、噬菌体、某些病毒、标记等)3)将克隆得到的目的基因与载体连接 4)将重组载体通过某种手段转入受体,即宿主中(化学转染、脂质体、电转、显微操作等)5)...
shRNA
真核表达载体构建
YRBIO-shRNA表达系统
答:
YRBIO系统以这个shRNA库为基础,为每个
基因
提供3~5条高质量shRNA序列,并
构建
到shRNA
真核表达载体
pYr系列中,如pYr-1.1-hU6-EGFP。只需确定目标基因,即可从数据库获取对应序列,选择合适的shRNA表达系统进行实验。系统提供hU6、mU6、hH1和h7SK等多种polIII型启动子选择,包括荧光标记和非标记载体...
shRNA
真核表达载体构建
TRC及TRC shRNA库
答:
其中包括Massachusetts General Hospital、Harvard Med school、Dana Farber Cancer Inst、The Broad Institute、Whitehead Institute、MIT以及台湾的Academica Sinica等知名机构,代表着RNA干扰研究的最高水准。其目标是在未来三年内,
构建
出覆盖人类和小鼠
基因的
庞大shRNA库,具体计划是每种生物总计15,000个基因的...
基因载体
与
基因表达载体的
区别?
答:
一、构成不同 基因表达载体:构成包括启动子、终止子、标记基因、目的基因。重组质粒:构成包括目的基因片段、质粒、酶。二、对象不同 基因表达载体:
基因表达载体的
对象通常是活细胞。重组质粒:重组质粒的对象通常是细菌。三、原理不同 基因表达载体:将不同来源的基因在体外
构建
杂种DNA分子,然后导入活细胞...
利用
基因
工程生产胰岛素
的过程
如下图,据图回答:?
答:
解题思路:分析题图:图示表示利用基因工程生产胰岛素的过程,①表示
基因表达载体的构建过程
,该过程需要限制酶和DNA连接酶;②表示将目的基因导入受体细胞的过程;③表示目的基因在受体细胞中表达;④表示蛋白质的加工过程.(1)获取
真核
生物的目的基因一般选择从cDNA文库中获取.(2)将目的基因导入微生物...
原核表达载体和
真核表达载体的
区别
答:
一、表达载体不同:原
核表达载体构建
重组表达载体:1、载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
真核
细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体,具有对方面的...
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