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基因表达载体成功率低的原因
如何提高目的
基因
与
载体
连接的效率
答:
要构建重组载体的目的就是把目的基因连到载体上,所以最有效的重组dna是目的基因-载体
。目的基因-目的基因和载体-载体都是失败的结果,这种结果的产生相对导致基因-载体的结果产生率下降。一般做重组载体选择双酶切后连接,可以避免载体和目的基因的自连。目的基因的转化 根据不同的物种,将目的基因转化到...
基因表达
水平主要受什么因素影响
答:
5.细胞的代谢负荷
外源基因在细菌中高效表达,必然影响宿主的生长和代谢,而细胞代谢的损伤,又必然影响外源基因的表达。合理地调节好宿主细胞的代 谢负荷与外源基因高效表达的关系,是提高外源基因表达水平不可缺少的一个环节。
转
基因
为什么不能直接用PCR产物连接在
表达载体
上?
答:
主要是因为你没办法保证你的序列的重复性
。如果直接用PCR产物的话,由于你的模板并不一定是完全一致的,即使有少量的mRNA有碱基错配,很有可能就在PCR反应中这些错误的mRNA反转录的cDNA就被无限放大了,这样你连上去的序列就不一定准确了。但如果是装入克隆载体的序列,从克隆载体上获得的序列就有绝对的...
目的
基因
不能
表达的原因
有哪些?比如,
载体
没有进入,还有什么?
答:
总的来说有两方面的原因,
一个是表达载体的问题,另一个是表达受体的问题
。载体可能出现的问题是发生突变或者被修饰导致启动子缺失或者位置发生改变。
受体方面,受体的突变也可能导致无法表达
。有些时候即使两个都正确也有可能不表达,需要多筛选来看看。还有某些情况下,某些基因可能不适合在某些受体中表达。
原核系统中影响外源
基因表达
效率的主要因素?
答:
如果外源基因是来自于原核生物,由于表达机制的差异,这些基因在植物体内往往表达水平很低
,例如,来自于苏云金芽孢杆菌的野生型杀虫蛋白基因在植物中的表达量非常低,研究发现这是由于原核基因与植物基因的差异造成了mRNA稳定性下降。美国Monsanto公司Perlak等人在不改变毒蛋白氨基酸序列的前提下,对杀虫蛋白基因进行了改造,选用...
构建
基因表达载体的原因
构建基因表达载体的原因简述
答:
1、构建
基因表达载体的原因
是因为如果没有表达载体,基因是无法进入目的细胞的,只需要记住在植入基因时构建载体即可。2、表达载体是必须构造的,一般为质粒(小型环状DNA)。3、如果没有表达载体你想要植入基因是不能实现的,先用限制性内切酶切开质粒,然后将基因插入,在用DNA连接酶连接上,记住连接酶和...
表达载体
导入受体细胞仍不能获得目的
基因的
产物
原因
是?
答:
基因表达载体
导入受体细胞仍不能获得目的基因的产物
原因
比较多,可能是不能转录,也可能是不能翻译,所以得不到基因产物。
基因表达载体的
构建所需的条件
答:
标记基因:用于检测是否已经植入目的基因。植入的
成功率
其实很低,所以有必要选出已经植入的个体。比如抗虫棉,判断是否植入,用种植后让虫子吃的方法判断周期太长。所以在目的基因前或后植入比如抗四环素基因(如果目的
基因成功
植入,抗四环素基因也一起植入),然后用四环素来淘汰植入失败的个体,剩下的都是...
关于
基因表达载体的
构建
答:
基因表达载体的
构建,即目的基因与运载体结合,是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心,其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。构建条件:1、必须能够在宿主细胞中复制,使重组基因能够在宿主基因中复制,从而稳定保存下来,这是...
基因表达载体的
构建所需的条件
答:
作为一个
基因表达载体
,必须要满足以下条件:1.细菌的复制起始位点Ori;2.用来对转入质粒的细菌进行筛选的抗性基因比如:Kan Amp spec 等抗性筛选基因。3.一个基因如果能够表达还需要启动子(promoter)、基因编码区(CDS)和终止子(terminator)。CDS区需要起始密码子ATG和终止密码子TAA。4.如果是原核表达...
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