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大肠杆菌感受态细胞的制备与转化
大肠杆菌感受态细胞的制备
感受态细胞制备成功关键有哪些
答:
统计每个培养皿中的菌落数。转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数
和转化
频率,公式如下:转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积 转化频率(转化子数/每mg质粒dna)=转化子总数/质粒dna加入量(mg)
感受态细胞
总数=对照组2...
CaCl2法
制备大肠杆菌感受态细胞
原理?
答:
目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2和RbCl/KCl法
,RbCl/KCl法制备的感受态细胞转化效率较高,但CaCl2法简便易行,且其转化效率完全可以满足一般实验的要求,制备出的感受态细胞暂时不用时,可加入无菌甘油至总体积15%,于-70℃保存半年之久,因此CaCl2法为使用更广泛。生物帮上面有的,功能分析细胞系 ht...
大肠杆菌感受态细胞的制备及
质粒的
转化
结果怎么分析?
答:
材料及方法 菌种:大肠杆菌BL21菌株 质粒:
pGEX-6P-1感受态制备方法:CaCl2法 转化方法:热激法 CaCl2制备感受态的原理
。细菌处于0·C,CaCl2的低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42·C短时间热冲击处理,促使细胞吸收DNA复合物。感受...
感受态细胞的制备
方法是什么?
答:
感受态细胞制备常用方法是CaCl2法
。感受态细胞:是指用理化方法诱导细胞,吸收周围环境中的DNA分子,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。CaCl2法制作感受态细胞的步骤:1.将大肠杆菌DH5a感受态细胞接种于普通LB平板上, 37℃恒温培养箱培养12-16h,挑取单个菌落,接种至10 mLLB普通肉汤中,37空气摇床震...
大肠杆菌感受态细胞的制备
方法步骤谁能介绍下!
视频时间 1:10
大肠杆菌感受态细胞的制备
要注意哪些因素
答:
(1)质粒DNA的质量和浓度:用于
转化
的质粒DNA应主要是超螺旋态的,转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时,则会使转化率下降。一般地,DNA溶液的体积不应超过
感受态细胞
体积的5%,1ng的cccDNA即可使50ul的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言...
大肠杆菌转化
的机理与
感受态细胞的制备
方法的研究进展(希望答案详细...
答:
因此,Ca2+诱导
大肠杆菌
建立
感受态
并实现DNA
转化
,既是一个物理化学过程,也是细胞自身生理调节的反应过程。这些研究结果对于我们探索大肠杆菌摄取外源DNA的分子机理,提高基因工程操作中将重组DNA导入受体
细胞的
效率,以及正确评估大肠杆菌可能发生的水平基因转移事件具有重要意义。参考的资料是一篇题为《Ca2+诱导...
常用
感受态细胞制备方法
有哪些?
答:
方法一:细菌
转化
的方法多以Mendel和Higa(1970)的发现为基础,其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌,使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的
大肠杆菌感受态细胞
,常用于成批
制备感受态
细菌。本法适用于大多数大肠杆菌菌株,且迅速、重复性好。操作过程简述如下。1.从37℃...
谁做过酶切质粒的实验啊,制
感受态细胞
然后
转化
呢?求详细过程
及
注意要点...
答:
大肠杆菌
电
转化感受态细胞制备
第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用 第二天: 4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有50...
大肠杆菌感受态细胞制备
试验中为什么
转化
后要在37℃摇床上温育45min...
答:
转化
后,
大肠杆菌
的细胞膜通透性增强,不利于大肠杆菌的生长繁殖,温育的过程是它恢复活力的过程,这时用的培养基是不含抗生素的,不然的话抗生素容易进入细胞内,对
细胞的
生长不利。经过这一过程大肠杆菌恢复了活力之后才可以涂布在含某些抗生素的平板上以做筛选。
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