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大肠杆菌本底表达
我用BL21(DE3)菌株
表达
一外源基因,用IPTG诱导,为什么我不加IPTG的对照...
答:
有两种可能,一种是大肠杆菌里本身有这么大小的蛋白,不过这个可能性太小。另外一个是叫做本底表达,
就是你导入后目的蛋白在未诱导情况下也会表达
,这可能是大肠杆菌产生了类似IPTG的物质,这个在原核表达中是很常见的,如果本底表达量不大的话对实验结果没什么影响的。
实验专栏 |
大肠杆菌
原核
表达
的整体思路
答:
第五步:大量
表达
经过小量表达的优化后,根据所需蛋白量,按照优化的条件进行大量表达。确保实验的重复性,严格进行放大操作。收集菌体后,使用预冷的PBS清洗,若不立即纯化,建议进行液氮冷冻后保存于-80℃。在整个过程中,
大肠杆菌
原核表达系统为蛋白质表达提供了便利,但实际操作中仍需细心关注每个环节...
用乳糖操纵子学说解释基因对酶合成的调节作用
答:
大肠杆菌中的lac基因是可处于本底话表达水平
,及阻遏蛋白并不是时刻与其操纵基因相结合,而是偶尔分离,使其微量表达;微量表达的基因有lac透过酶,可以使lac进入菌体内部;而本底表达的lac异构酶使其异构化,与阻遏蛋白结合,使其失活,与lac基因脱离,造成lac基因的大量表达,达到正性循环。开始处于不含...
分子克隆
步骤
答:
M13噬菌体是一种独特的载体系统,它只能侵袭具有F基因的
大肠杆菌
,但不裂解寄主菌。M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子,象质粒一样自主制复,制备方法同质粒。寄主菌可分泌含单链DNA的M13噬菌体,又能方便地制备单链DNA,用于DNA顺序分析、定点突变和核酸杂交。③拷斯(Cos)质粒:是一类带有噬菌体DN...
做
大肠杆菌
沙门氏菌 葡萄球菌 巴氏杆菌的实验检测 一般都用什么方法...
答:
本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性
。如MUG阳性、靛基质阳性,判供试品检出大肠埃希菌;如MUG阴性、靛基质阴性,判供试品未检出大肠埃希菌;如MUG阳性、靛基质阴性,或MUG阴性、靛基质阳性,则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上,培养18~24小时。若平板上...
请推断Lac operon
本底
水平的意义
答:
在
大肠杆菌
的乳糖系统操纵子中,β-半乳糖苷酶,半乳糖苷渗透酶,半乳糖苷转酰酶的结构基因以LacZ(z), Lac Y(y),Lac A(a)的顺序分别排列在质粒上,在z的上游有操纵序列Lac O(o),更前面有启动子Lac P(p),这就是操纵子(乳糖操纵子)的结构模式。编码乳糖操纵系统中阻遏物的调节...
什么是
本底
转录!下面这段话中的调控过程是怎么回事?
答:
也就是说正常情况下,不缺乏葡萄糖时,lacO应该不
表达
;而缺乏葡萄糖且乳糖存在时,lacO大量表达。但重组
大肠杆菌
中,葡萄糖水平正常情况下lacO的转录就是本地转录。多拷贝的是一个lacO携带lacUV5或tac启动子(1个启动子就够了,不需要2个)。这两种都可以结合阻遏蛋白。在不缺乏葡萄糖的情况下,也会...
lacuv5启动子
答:
在常规的
大肠杆菌
中,lacI阻遏蛋白表达量不高,仅能满足细胞自身的lac操纵子,无法应付多拷贝的质粒的需求,导致非诱导条件下较高的
本底表达
,为了让表达系统严谨调控产物表达,能过量表达lacI阻遏蛋白的lacIq突变菌株常被选为LacTactrc表达系统的表达菌株。现在的LacTactrc载体上通常还带有lacIq基因,以表达...
为什么质粒构建正确,在37度诱导不能
表达
,高温42度却有表达,但分子量却...
答:
是不是启动子是高温启动子,例如热激蛋白的启动子,这样就只有高温诱导才
表达
了。如果是
大肠杆菌
的话在高温可能翻译过程不稳定,导致在遇到某些稀有密码子时翻译中止。
紧急求助:考研生物化学题
答:
子有一个
本底
水平(basal level)的
表达
,即使没有诱导物的存在,它也保持此表达水平(诱导水平的0.1%),而有的诱导物是通过其它的吸收系统进入细胞的。三、操纵基因和调节基因的鉴别野生型的操纵子以被调节的方式进行表达,调节系统若发生突变可能使表达停止或者在没有诱导物存在时仍然表达。前者称为不可诱导性(un...
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