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小标签带小蛋白
...一条条带略小的非目的
蛋白
,且同样
带有
组氨酸
标签
,疑似转录时断裂造成...
答:
你是如何知道那条非目的条带也
带有
组氨酸
标签
的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂
蛋白
,也可能目的蛋白部分降解。要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到。可能试试再加一步甚至多步层析步骤以期得到高纯度的蛋白。可以选择的层析方法推荐使用反向、离子交换。
常见的融合
蛋白
表达
标签
有哪些呢?
答:
1.
标签
的分子量小,只有~0.84KD,而GST和
蛋白
A分别为~26KD和~30KD,一般不影响目标蛋白的功能; 2.His标签融合蛋白可以在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化,前者在纯化疏水性强的蛋白得到应用,后者在纯化包涵体蛋白时特别有用,用高浓度的变性剂溶解后通过金属螯和亲和层析去除杂蛋白,使复性不受其它蛋...
【小远答疑】Co-IP以及IP-MS相关实验问题解惑
答:
2.
小标签蛋白
在Co-IP中的检测问题在实验中,小分子标签蛋白(如His-Tag、Flag-Tag)作为对照可能在Input组没有明显条带,这是正常现象。如图3所示,BAK1与PUB13的实验,小标签的缺失并不表示实验失败,关键在于后续分析。3. IP组标签的一致性IP组标签不一定要与对照一致,这取决于实验设计,如图1...
几种常用的
蛋白标签
的功能和优点
答:
1. His6
标签
:其六个组氨酸残基组成,便于纯化和检测,通过IMAC法分离,分子量小,不影响目标
蛋白
功能。优点包括:纯化条件温和,适用于疏水蛋白和包涵体蛋白,用于蛋白相互作用研究,且具有低免疫原性。2. Flag标签:编码8个氨基酸,提高真核表达效率,非变性纯化且易于检测,用于蛋白表达、纯化、鉴定和功能...
如何理解食品营养
标签
上标示的能量、
蛋白质
、脂肪?
答:
标签
的基本要求 1、应符合法律、法规的规定,并符合相应食品安全标准的规定。2、应清晰、醒目、持久,应使消费者购买时易于辨认和识读。3、应通俗易懂、有科学依据,不得标示封建迷信、色情、贬低其他食品或违背营养科学常识的内容。4、应真实、准确,不得以虚假、夸大、使消费者误解或欺骗性的文字、...
蛋白质
融合
标签
答:
HA标签,属于
小标签
,共9个氨基酸,标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,对目标蛋白的空间结构影响小, 可融合到N端或者C端,可购买商业化的Anti-HA抗体检测。HA标签常用于
蛋白质
印迹,免疫荧光和免疫沉淀实验,偶尔用于ELISA和ChIP分析。 2) His His标签,也是小标签,多指6个组氨酸多肽,该标签...
关于
蛋白标签
的那些事
答:
标签
的大小对
蛋白
功能可能有影响,小分子标签如His、Flag、HA、Myc适合成本节约,大分子如SUMO、GFP等则可能影响蛋白功能。通常,需要在纯化后去除标签,以保留目的蛋白的完整性。酶切位点的选择需考虑酶特异性和残留氨基酸影响。标签的位置需根据蛋白特性决定,N端或C端标记,对于难表达或易降解的蛋白,N...
我想要加一个
标签
便于
蛋白
的纯化,加完标签之后想要用真核表达蛋白,应该...
答:
理论上,都是可以用于真核表达的,这些
标签
只要不会影响
蛋白
本身活性就没有任何问题。给你举个离子,在植物转基因中,就有一经典方法检测蛋白表达情况的,就是在蛋白后面带上his tag,然后待转基因植株出来后,就用抗his taq的抗体(商用的,有卖)做western或者ELISA去检测和定量转入的蛋白。这种方法...
标签蛋白
大盘点
答:
HA
标签
源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇,易于检测和ELISA检测,适用于检测目的
蛋白
,对蛋白结构影响较小。C-Myc标签,包含人类原癌基因Myc中的10个氨基酸片段,通过高特异性的抗Myc单克隆抗体广泛用于检测体系,较少用于纯化。V5标签来源于副黏液病毒P/V蛋白,适用于哺乳动物和昆虫表达体系,主要...
常见
蛋白标签
-6xHis标签
答:
6xHis
标签
,也称为多组氨酸标签(polyhistidine ),His6标签或hexa组氨酸标签,这是一种在转染的细胞中目标
蛋白
的C端或N端上由至少6个组氨酸残基链接上所组成的氨基酸序列,它的序列如下所示: 相对小的分子量,低的免疫原性,亲水性和在去污剂和其他添加剂存在的情况下的易变性,因此在天然和变性的条件下,多组氨酸标签是...
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