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已知某质粒中克隆了一段序列
当
克隆
到
一段
DNA
序列
后,采用哪些策略判断它是否为编码功能蛋白质
的
完...
答:
用软件如DNAMAN或者DNASTAR翻译一下,看是否是一个完整的开放阅读狂,中间是不是有突变位点,如果是完整的,而且没有突变位点,一般来说就要进行蛋白质的原核表达,看是否有目的带的表达,后面还可以做纯化,测活性等等
只表达
一段序列的质粒
需要什么条件
答:
只表达
一段序列的质粒
需要条件是分子质量小、DNA结构清楚,具体如下:1、根据查询分析测试百科网显示信息,
一段序列质粒
食物相对分子质量尽可能小,质粒越小拷贝数越高,便于提取和纯化。2、DNA结构和功能清楚,
质粒序列中
具有包含单一限制酶,酶切位点的多
克隆
位点,便于带有不同末端的外源片段的插入。
假如一个
质粒当中
含有RNA基因
克隆的
大肠杆菌菌株,如何显示RNA基因存在...
答:
取这段RNA
序列
中一段特异性高的序列做成探针,荧光标记。然后做FISH (荧光探针原位杂交)就可以显示是哪一个染色体和该探针发生杂交,从而定位了。
克隆质粒
多
了一
个碱基
答:
我用TAKARA的PRIMESTAR扩增
的一段序列
,3400BP长,建好克隆后测序。结果发现中间插入了一个C碱基。本来模板是CCCCC,测序结果呈现CCCCCC。在图片的鼠标指示处。测序图峰很好,是不是可以肯定地说我
的克隆
有插入突变了?比较郁闷。PRIMESTAR不是错配率万分之几吗?1.JPG(44.9 KB)2006-07-20IP 山东...
如何利用pGL3
质粒
验证
一段
DNA
序列
是否具有启动子活性?
答:
可以将pcr扩增好的DNA
序列
通过酶切连接的方式插入到pGL3载体的多
克隆
位点,拿到重组载体后,转化细胞,检测荧光变化,如果荧光比值明显增大,说明这一段DNA具有启动子活性。
质粒克隆
实验目的
答:
学习和掌握碱裂解法小量提取质粒。
质粒克隆
是克隆实验
的一
种,其实验过程繁琐,目的是为了学习和掌握碱裂解法小量提取质粒。基因克隆基因ORF或者干扰
序列
表达质粒是现代分子生物学常用的研究工具。
如何利用
克隆
载体提取
已知序列
答:
然后提取质粒,将目标片段从
克隆
载体上切下来(内切酶酶切),然后连进表达载体,转进表达菌。第三步,诱导表达,将含有
质粒的
表达...
质粒
系列之限制性
克隆
--restriction cloning
答:
以上是
质粒
命名的一些通用规则,有时候质粒不一定严格按照以上规则命名,但可以举一反三,窥得其中一些规律。例子:限制性克隆是我们最常用
的克隆
技术,不仅操作便捷,单位价格低廉,还特别好使。限制性克隆,顾名思义,即使用限制性内切酶切开载体,并插入
一段
拥有适配酶切位点的片段,如下图:在设计和...
用原核载体
克隆
并表达一种生物中
的
某个基因(
序列已知
),这种生物若是一...
答:
然后设计引物将
序列已知
从细菌或者真核细胞细胞PCR扩增出来(当然了,要先提取基因组),将扩增出来的产物连进
克隆
载体,转进感受态,培养以扩增拷贝数,这样就可以得到大量
的质粒
。然后提取质粒,将目标片段从克隆载体上切下来(内切酶酶切),然后连进表达载体,转进表达菌。第三步,诱导表达,将含有质粒...
分子
克隆
——例子
答:
后来我看了很多文献,发现除了Gibson Assembly之外,其实还有很多好用
的质粒
构建方法,与Gibson Assembly几乎同时出现的Golden Gate Assembly就是其中
的一
种,这两种方法都可用于无缝
克隆
。 Golden Gate Assembly是一种新型的酶切连接方法 [1, 2],与传统的酶切连接方法不同。传统的酶切连接方法采用标准的II型限制性内切酶...
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