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真核表达蛋白在沉淀里
真核蛋白表达在
细胞超声
沉淀中
该怎么办
答:
因为原核生物缺乏翻译后的修饰,所以表达的
真核蛋白
和
真核中表达
有所差异,可能没有生物学活性等,但是要是做免疫原应该没问题; 基因需为cDNA,不能含有内含子,原核细胞不能对mRNA进行剪切; 要分析DNA序列信息,分析其密码子,由于原核与真核。
原
核蛋白表达
,总是
在沉淀中
,怎么解决
答:
应该是原
核表达
宿主菌比较准确 原核表达宿主菌之前可以
表达蛋白
,放一段时间不表达蛋白原因很多 首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒载体,表达条件等等 原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成
蛋白表达
变少或者不表达。
为什么
表达
的
蛋白
会变性
沉淀
答:
我想应该是不同的
表达
菌株有不同的合成酶系以及修饰和转运方式,例如大肠杆菌没有信号肽和分子伴侣,所以很多外源
蛋白
的表达是以包涵体形式出现
在沉淀里
,而酵母菌能够进行糖基化和跨膜运输,就能够外分泌可溶表达.别说...
我想要纯化的
蛋白
主要
在沉淀里
高手指点哈
答:
原
核表达
吧?那麻烦了,得先拿8M尿素变性,然后2M尿素复性,具体是有点麻烦,还得看你的
蛋白
二硫键的多少,这直接影响到复性的效果。反正挺复杂,建议从CNKI里下些原核表达的博士硕士论文看看,这样的写的步骤比较全。
真核
生物的转录
答:
在早期的实验指出,另外有一个转录因子TFⅡA会结合到起始复合体上并稳定其结构,但目前已证实TFⅡA只是在纯化TFⅡD时一起
沉淀
下来的
蛋白
而巳,在转录的起始过程中并非是必需的因子。 步骤二:TFⅡB 如图三,转录因子TFⅡB对起始复合体的结合与否,为转录起始作用过程的速率限制步骤(rate-limiting step)。而RNA聚合酶...
用碱裂解法提取质粒DNA,为什么不会得到线形DNA?
答:
因为
真核
细胞DNA上有蛋白质结合,如果用碱裂解法就会把DNA与蛋白质一起沉淀碱裂解法提取质粒DNA,原理是细胞内
蛋白质在沉淀
的过程中会把大的DNA分子一
表达
菌不同会造成
蛋白在
上清与
沉淀
的不同吗
答:
所以很多外源
蛋白
的
表达
是以包涵体形式出现
在沉淀里
,而酵母菌能够进行糖基化和跨膜运输,就能够外分泌可溶表达。别说是不同的菌株了,就算是同一种菌株在不同温度和诱导条件下也可能对同一蛋白出现不同的表达策略,例如GST标签的蛋白就经常在大肠杆菌里以低温进行可溶性表达。
原
核表达
常见问题(三)
蛋白
纯化后续的问题分析
答:
常见的例子就是硫酸铵
沉淀
纯化IgG。同样,硫酸铵沉淀也常碰到不可逆的情况。例如大肠杆菌(Escherichia coli)
表达
的重组
蛋白
往往在硫酸铵沉淀后再溶困难。3.在Ni纯化的过程中,有一部分镍离子会脱落,脱落的镍离子属于重金属,会对蛋白的凝集和沉积起到一定的作用。4.蛋白反复冻溶,过程中生成的一些小冰晶...
RT-PCR实验操作的注意事项
答:
要
表达真核
生物的基因并表达出相应的
蛋白
,只能通过提取其mRNA并RT-PCR这条颇费周折的途径。1.RNA的提取RNA的提取其实原理很简单:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过
沉淀
,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前...
如何看免疫
沉淀
的结果图?
答:
说明基因1在肌肉细胞
中
转录后2号外显子随着内含子剪切而被剪切掉了。这个实验一定程度上支持了
真核
生物的基因是断裂基因的结论,也说明了同一个基因的转录后修饰(外显子剪接)在不同的细胞和组织里可能会有差异,进而形成不同的转录本,翻译出功能不同
的蛋白质
。
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