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酵母真核表达上清有两条蛋白带
真核表达
分泌型
蛋白
, 有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定...
答:
上清
收了做ELISA 细胞直接裂解提
蛋白
做WB
如何在
真核
生物中抽取
表达蛋白
?
答:
如果是分泌
蛋白
,可以从培养
上清
中纯化。如果是胞内蛋白,最好在蛋白上接一个TAG,比如FLAG-TAG,然后用FLAG的抗体进行亲和纯化。
冷冻干燥
酵母表达上清
后怎样进行
蛋白质
电泳
答:
已经是干燥的粉末吗?可以溶于 25mM ABC或者 8M Urea都可以,然后进行电泳就可以了。
蛋白
的
表达
与纯化
答:
coli中就是表达不出,可能是密码子优化等出现问题,也或者是由于想纯化得到更好的活性
蛋白
的考虑(原核的蛋白折叠系统显然没有
真核
的好),有很多研究者选择在毕赤
酵母
中表达。(我手里就有相关资料,因为以前做过表达纯化及后来的单抗制备),这一步再强调一下,优化密码子对于蛋白的成功表达很重要 3 载...
表达
菌不同会造成
蛋白
在
上清
与沉淀的不同吗
答:
我想应该是不同的表达菌株有不同的合成酶系以及修饰和转运方式,例如大肠杆菌没有信号肽和分子伴侣,所以很多外源
蛋白
的表达是以包涵体形式出现在沉淀里,而
酵母
菌能够进行糖基化和跨膜运输,就能够外分泌可溶表达。别说是不同的菌株了,就算是同一种菌株在不同温度和诱导条件下也可能对同一蛋白出现不同...
GST pull down 实验细节问题求教
视频时间 6:11
酵母
的转化和克隆
答:
细胞置于42摄氏度水浴热激15min,然后置于冰上冷却2min,离心收集细胞。细胞用双蒸水重悬后涂板在含有载体相应抗性的选择性培养基上。转化后的平板在30摄氏度继续培养
2
-4天,直到长出克隆。应用目的:鉴定与诱饵
蛋白
相互作用的蛋白。 将来自候选结合蛋白文库的质粒转化
酵母
细胞,如果它编码的蛋白与诱饵...
求RT-PCR 流程和注意事项
答:
有关内参: RT-PCR内参照可以在一个管子里做(那样也是图好看一些),最好分开两管,把除了引物之外的mixture统一配,拍照后,算目的基因和内参的比值, 这就是基因表达的相对浓度。问:我曾经作过同一管的PCR,内有actin 和目的基因引物。虽然可见到
两条
均一
条带
但图片质量不理想(而且酶量、Mg2+加倍)。请教mxbdna2003...
PGEX系列
表达
载体的特点
答:
如果是全菌都没有表达,首先检查是不是你插入序列的问题,排出后看看是不是稀有密码子的问题,
真核
基因在原核细胞中表达会受到大肠杆菌稀有密码子的影响,网上有分析软件。如果稀有密码子比较多可以使用rosetta菌株来表达,应该能出来的,只要不是你序列的问题,没有出不来的
蛋白
,只是溶不溶,有没有活性...
微生物生长的几种检测方法
答:
大多数细菌的含氮量为干重的12.5%,
酵母
为7.5%,霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25,即可测定粗
蛋白
的含量。含氮量的测定方法有很多,如用硫酸,过氯酸,碘酸,磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合,在CO2气流中加热后产生氮气,收集在呼吸计中,用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。 2.10测定含碳量...
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