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重组纯化蛋白A
Protein A与Protein G有何不同?如何选择?
答:
Protein A与Protein G都是用于IgG
纯化
的亲和层析
蛋白
。它们均源自不同微生物,具有特定的IgG亲和作用,对其他杂蛋白结合力较弱,展现出极高的选择性。通常,通过一步亲和层析即可达到90%的纯度。Protein A来源于金黄色葡萄球菌,分子量约为42kDa,具有5个结构域,能特异性结合IgG的Fc片段,每个Protein A...
重组蛋白纯化
实验注意事项?
答:
亲和层析柱选择:根据目标蛋白的性质和特点选择合适的亲和层析柱。常见的亲和层析柱包括镍柱、葡萄糖柱、
蛋白A
/G柱等。注意根据蛋白的亲和配体选择合适的缓冲液和洗脱条件。温度和pH控制:在
纯化
过程中,需要注意维持适当的温度和pH条件。这有助于保持蛋白的稳定性和活性。使用合适的缓冲液和调节剂来维持适...
重组蛋白a
的higg binding 大于95%是怎么算的
答:
hIgG的结合效率有很多种算法,你可以用流穿效率来算。用1mg 的 hIgG 与你的
重组蛋白A
(已偶联到介质上)作用,如果最后纯化获得0.95mg。那么收率(binding)就是95
【整理】
蛋白
提取
纯化
,这一篇就够啦!
答:
选择合适的标签(如His、GST等)和HPLC
纯化
分析,对于获得高纯度蛋白和深入理解其特性至关重要。在大规模制备稳定物质后,疏水反相HPLC分离技术根据极性差异进行吸附和洗脱,而
重组蛋白A
琼脂糖凝胶FF则用于大规模血清IgG的纯化,结合抗体等配体。在选择Western内参蛋白时,要根据实验需求灵活选用。面对His标签纯化中的杂带问题,...
胶体金法是一种什么样的方法?
答:
如竞争法,需将小分子偶联到大分子物质上)中。在抗体检测中,间接法也常用胶体金标记,通过
纯化
或
重组
的抗原与
蛋白A
结合,实现对血清中抗体的敏感检测。总而言之,胶体金法是一种巧妙结合了胶体物理性质和免疫学原理的标记技术,通过其特性和优势,在医学检测和科学研究领域展现出了强大的实用价值。
多克隆抗体的
纯化
方法都有哪些
答:
并且
纯化
效果是其他方法的数倍.因此在所有方法中,我推荐这种方法.有一种情况不适于应用蛋白G 或
蛋白A
亲和柱纯化抗体,即多克隆抗体需要进一步分离,且针对某种特异性抗原的组分需要分离.此时可用抗原结合的亲和柱纯化抗原恃异性抗体.原理就是抗原抗体的结合.蛋白A和G被锚定在树脂上,IgA和IgG在过树脂柱子...
重组蛋白
以fc标签和his标签的区别
答:
不同的标签形式对应着不同的纯化操作条件以及
重组蛋白
表达和应用的需求。义翘采用Fc标签通常是为了提高蛋白的可溶性,另一方面也是 义翘的Fc亲和纯化用到的
蛋白A纯化
介质、蛋白G纯化介质用起来非常好用,载量、亲和效果、价格、使用次数都有不错的表现。义翘采用His标签是用作一般非金属亲和蛋白的纯化。
蛋白a
在
纯化
中会到什么问题
答:
A、分离细胞器常用的方法是差速离心法,利用不同的离心速度所产生的不同离心力,将各种细胞器分开,A正确;B、
纯化蛋白质
可用电泳法、凝胶色谱法,不用纸层析法,B错误;C、用放射性同位素标记法追踪氨基酸的转移途径进而研究分泌蛋白的合成过程,C正确;D、健那绿染液是活体染色剂,观察线粒体利用健...
求助JSR,Repligen,TOSOH,POROS的
蛋白A
亲和填料
答:
ps/dvb基材的硬胶,离子交换非常棒,protein A的填料在美国抗体界也有药在生产上用。如果一定要在这几个品牌里选,个人推荐POROS。如果可以考虑别的选择,那么millipore也是很好的选择。个人不太喜欢GE的Mabselect SURE,软胶,效率不高,实验室用用还可以,但是大规模
纯化
上有弊端的。
过proteina柱
纯化蛋白
为什么用醋酸
答:
在改变pH的条件时亲和配基不再结合Fc区域的蛋白。通过流动相蛋白被洗脱下柱子。又因为Protein A柱的亲和配基在碱性条件下可能会从琼脂糖树脂上脱落,所以一般会选择酸性的洗脱条件。一般会用的洗脱液有醋酸醋酸钠缓冲液,甘氨酸盐酸缓冲液,柠檬酸柠檬酸钠缓冲液等等 所以过proteina柱
纯化蛋白
会用到醋酸。
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