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IPTG诱导表达时间越长越好吗
用IPTG诱导表达
的
时间
是否
越长越好
,为什么?
答:
用IPTG诱导表达的时间不是越长越好
,因为只有在特定的环境信号(加入IPTG)刺激下,目的基因才会被激活,之后才会产生大量的代谢表达产物,收集有较多表达量的菌体。如果不用IPTG的话,大部分目的蛋白是不会表达的,有少部分可能会有极少量的表达,称之为泄漏表达。科学研究:IPTG常用于需要诱导β-半乳糖...
重组大肠杆菌在
表达
蛋白过程中注意哪几个问题
答:
1诱导时间IPTG诱导时间过长会出现包涵体,诱导时间过短会出现蛋白产率不高
。2.诱导温度;IPTG诱导的适宜温度为25℃~30℃,有利于蛋白产率的提高。3,诱导剂浓度:合适的诱导剂浓度可以提高蛋白产率,浓度过高容易出现包涵体。4.IPTG加入时间:诱导剂过早的加入会对菌生长有抑制作用。一般在对数生长期,即OD...
诱导表达
时
IPTG
加的
时间
太早有影响吗?
答:
如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加
IPTG的
话,对菌的生长有抑制作用.菌浓度过低,蛋白的
表达
量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
诱导表达
时
IPTG
加的
时间
太早有影响吗?
答:
有影响。加了之后,细菌提前
表达
,很多菌一开始表达自己就会很快死掉的。所以如果你加得太早,蛋白的利率就会很少。
诱导时间
过长会怎样
答:
诱导时间过长会会出现包涵体,诱导时间过短会出现蛋白产率不高
。大量的细菌可能被杀死,同时诱导时问过长可能仅能反映少数耐药菌。
iptg
相比较乳糖
诱导
有何优越性
答:
IPTG不被菌体代谢,为乳糖类似物,一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以
IPTG的诱导
效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢,在胞内专一诱导外源蛋白的
表达
。不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用,既能做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做...
做低温
诱导
需要加
iptg吗
答:
需要的 低温诱导可以降低
IPTG的
量,比如0.1mM IPTG,延长
诱导时间
,比如12~16小时。不加IPTG的话只有极个别情况下会出现泄漏
表达
。一般都是不表达的。
诱导
式
IPTG的
浓度应该好多?要试验确定吗
答:
一、需要做实验确定,
诱导
时
IPTG的
浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度。二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导。三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋白
表达
达到最高值,最后收菌后,加上以前的取得样品跑SDS-PAGE胶检验...
诱导
剂
IPTG的
浓度如何确定?浓度对实验的影响如何?
答:
一般用1mM
IPTG
进行诱导,个人认为诱导浓度影响不大,主要是温度和
诱导时间
大肠杆菌
诱导
后,收集菌体,用水洗的时候变成黏糊糊的一团
答:
菌体变粘说明已经自溶了。具体的自溶原因,不清楚你
表达
的蛋白有没有毒性,不过
IPTG诱导
浓度0.1mM应该足够了,
诱导时间
10h也没啥必要,一般4-6个小时就够了。收集菌体时,是否自溶你看不清楚的,洗涤菌体最好用生理盐水洗涤,这样能维持渗透压。
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