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IPTG诱导GFP表达及荧光检测
GFP
筛选原理
答:
gfp
本身是绿色
荧光
蛋白(green fluorecent protein)的缩写,至于你说的大肠杆菌gfp是个菌,要么是可以
表达
绿色荧光蛋白的大肠杆菌重组菌,要么是你把蛋白和菌搞混了。载体带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个...
pet28a是低拷贝质粒,当插入
GFP
后,会不会影响pet28a-GFP的
荧光
蛋白强度...
答:
这个主要是看你的
GFP
蛋白
表达
量的,和质粒拷贝数多少并没有多大关系.表达量低了,一般是和你的
诱导
条件有关,你需要优化你的诱导条件.如
IPTG
浓度,诱导时间,诱导温度等等.
...重组子的筛选
诱导表达以及
如何
检测
和纯化表达产物
答:
1、一般是通过设计软件,例如oligo6,primer5等,你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明,是比较容易的。我一般用DANMAN设计引物,这个软件操作简单,占用资源也小。至于设计引物的一般原则如下:序列选取应在基因的保守区段 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状...
20220629 知识整理1-质粒
答:
分为正向,如CAP和CAMP激活,负向,如LacI会产生阻遏蛋白阻止转录,在乳糖
和IPTG
条件下可被解除. 标签 :flag,HA,
GFP
等,有时为了增强观测效果会串联标签蛋白,需要注意标签在蛋白
表达
的N端或C端,可能会影响目的蛋白的功能;若为了获得稳转株,会借助病毒表达系统,如慢病毒,病毒基因组整合宿主细胞;腺病毒,...
质粒图谱怎么看
答:
2.第二步,看上面的标签。报告基因:通常会有一两个蛋白,被用作报告基因,比如常见的cop
GFP
(绿色
荧光
蛋白),Puro(嘌呤霉素),Lacz(乳糖操纵子)等等。和抗性基因不同,这样的报告基因,并不是为了在大肠杆菌扩增质粒的过程中起作用的。而是在质粒转入
表达
体系后起到作用的,基本上就是为了显示过...
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