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IPTG诱导蛋白表达
原核
表达
系统中常用的调控元件有哪些?
答:
gene activation protein)因子和camp来激活启动子,促使转录进行。负调控则是由调节基因产生lacz阻遏
蛋白
,该阻遏蛋白能与操纵基因结合阻止转录。乳糖及某些类似物如
iptg
可与阻遏蛋白形成复合物,使其构型改变,不能与o基因结合,从而解除这种阻遏,
诱导
转录发生。(2)trp启动子:它来自大肠杆菌的色氨酸操纵...
原核
表达
系统中通常使用的可调控的启动子有?
答:
gene activation protein)因子和camp来激活启动子,促使转录进行。负调控则是由调节基因产生lacz阻遏
蛋白
,该阻遏蛋白能与操纵基因结合阻止转录。乳糖及某些类似物如
iptg
可与阻遏蛋白形成复合物,使其构型改变,不能与o基因结合,从而解除这种阻遏,
诱导
转录发生。(2)trp启动子:它来自大肠杆菌的色氨酸操纵...
原核生物
表达
系统的构建原则是什么?
答:
gene activation protein)因子和camp来激活启动子,促使转录进行。负调控则是由调节基因产生lacz阻遏
蛋白
,该阻遏蛋白能与操纵基因结合阻止转录。乳糖及某些类似物如
iptg
可与阻遏蛋白形成复合物,使其构型改变,不能与o基因结合,从而解除这种阻遏,
诱导
转录发生。(2)trp启动子:它来自大肠杆菌的色氨酸操纵...
乳糖操纵子
答:
lacI突变的特点可以从阻遏
蛋白
结构的得以解释。在阻遏蛋白上具有两种不同类型的结合位点。通过这些结合位点来控制基因的
表达
以对环境作为反应。DNA-结合识别操纵基因。
诱导
结合位点与小分子诱导物结合。一旦与诱导物作用使其构象发生改变而失去与操纵基因DNA结合的能力。通过lacI突变失去某些活性可以鉴别出阻遏物亚基中的两...
gst pulldown靶
蛋白
制备方法?
答:
1、构建表达载体:将目标
蛋白质
的编码序列克隆到GST表达载体中,使用限制性内切酶将克隆的DNA片段插入到GST表达载体中,使其与GST基因相连。2、转染表达:将构建好的表达载体转化到大肠杆菌中,并在含有诱导剂(如
IPTG
)的培养基中
诱导表达
,使其产生靶蛋白-GST融合蛋白。3、细胞破碎:通过超声波、高压...
启动子有哪些
答:
正调控通过CAP(catabolite gene activation protein)因子和cAMP来激活启动子,促使转录进行。负调控则是由调节基因产生LacZ阻遏
蛋白
,该阻遏蛋白能与操纵基因结合阻止转录。乳糖及某些类似物如
IPTG
可与阻遏蛋白形成复合物,使其构型改变,不能与O基因结合,从而解除这种阻遏,
诱导
转录发生。(2)trp启动子:它...
诱导表达蛋白
为什么要使用t4噬菌体的启动子而不用大肠杆菌自己的启动...
答:
Tac启动子受
IPTG
的
诱导
。(4)lPL启动子:它来自l噬菌体早期左向转录启动子,是一种活性比Trp启动子高11倍左右的强启动子。lPL启动子受控于温度敏感的阻遏物 cIts857。在低温(30℃)时,cIts857阻遏
蛋白
可阻遏PL启动子转录。在高温(45℃)时,cIts857蛋白失活,阻遏解除,促使PL启动子转录。系统由于受...
在细胞培养基中加入了庆大霉素会影响
蛋白表达
吗
答:
这个应该是跟乳糖操纵子有关,在葡萄糖存在下,乳糖操纵子不
表达
的。有利于
诱导
前质粒的稳定,抑制加
IPTG
前培养基中少量乳糖的诱导 建议你用0.3陪的LB加M9培养基,当A600达到1.5左右时25度过液诱导
原核
表达
系统中通常使用的可调控的启动子有哪些?
答:
gene activation protein)因子和camp来激活启动子,促使转录进行。负调控则是由调节基因产生lacz阻遏
蛋白
,该阻遏蛋白能与操纵基因结合阻止转录。乳糖及某些类似物如
iptg
可与阻遏蛋白形成复合物,使其构型改变,不能与o基因结合,从而解除这种阻遏,
诱导
转录发生。(2)trp启动子:它来自大肠杆菌的色氨酸操纵...
PGEX系列
表达
载体的特点
答:
pgex特点就是带有GST标签,可以增加目的
蛋白
的溶解度,别的没什么特点,属于大众型载体,目前也较常使用。你说的没有
表达
有没有做全菌的sds-page啊,不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带,至于形不形成包涵体就取决于你的
iptg
浓度和
诱导
温度了,iptg越低,温度越低可溶性越好,我们曾做过0.1的...
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