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pet表达载体的元件
大肠杆菌
表达
系统——
PET
-T7系统
答:
首先,表达过程分为三个关键步骤:导入编码目标蛋白的质粒(如
pET
-30a(+)),选择适合的生长阶段,以及适时诱导蛋白的合成。这个过程中,一个理想的
表达载体
不仅需具备基础的克隆功能,还需整合特定的转录和翻译调控
元件
。核心元件包括复制起始点ori,启动子(如T7 promoter),多克隆位点MCS,终止信号等。
pET
-his
载体
为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中
表达
?
答:
pET系列载体都用来自于λ 噬菌体的T7启动子
,该启动子转录需要用到T7 RNA聚合酶。而野生的大肠杆菌(比方说DH5α或BL21)体内没有该酶的基因,所以无法启动该启动子后面基因的表达。BL21(DE3)菌株是在野生型BL21菌株的基础上,整合了一段来源于λ 噬菌体的DE3片段,该片段中包含了编码T7RNA聚合...
pET
20b、pET22b和pET28a这3个质粒哪个能够承载外源基因并在EIB202迟钝...
答:
pET
系列的载体启动子我记得是T7噬菌体还是T4噬菌体的强启动子,在您做的爱德华氏菌中如果不能正常
表达
外源蛋白,建议:1.检查该菌是否是T噬菌体的宿主,如果不是,那么就应选择其他载体,或自行构建带有合适启动子的载体。2.检查转化是否成功,很多菌是非常难转进外源
载体的
。 以上。祝好运。
简述外源基因在
pET表达载体
中实现表达的基本原理。
答:
在
pET表达载体
中,外源基因的表达受T7噬菌体RNA聚合酶的调控,目标基因被克隆到不为大肠杆菌RNA聚合酶识别的T7启动子之下,在加入T7RNA 聚合酶之前几乎没有表达发生。加入IPTG诱导T7RNA 聚合酶的产生,激活T7启动子,启动转录,进而完成表达。
质粒
pET的
p的含义是什么,ET的含义是什么。
答:
p—plasmid(质粒),一般质粒
载体
前面都要加一个p E—E. coli (大肠埃希氏菌,通常称为大肠杆菌),为了表明这个载体是用于原核
表达的
。T—在这里代表T7启动子,该载体含有一个不为大肠杆菌RNA 聚合酶识别的T7 启动子用于诱导表达目的蛋白。
pet载体
原核
表达
基因的终止密码子要加吗
答:
主要是看
载体
谱图和你自己需要的,一般
pET
系列载体有时候会为了
表达的
蛋白纯化方便,会在你的蛋白C端后面添加一些标签(如His Tag),这些标签后面都带有终止子。如果你觉得你不需要载体所自带的这些标签,你可以自己添加上终止子。如果你需要载体后面的一些东西的话,你可以不添加。当然,有些早期载体是没...
1.2.基因工程常用的工具酶和
载体
有哪些
答:
限制性内切酶(BamH1, Sau3AI, 大概上百种,根据识别酶切位点的序列而定),CIP(碱性磷酸酶,去磷酸化,防止质粒自连)载体:对于细菌来说(质粒): 复制载体: pUC18, pUC19...对应使用的宿主如 Top10
表达载体
:pACYC,
pET
系列的质粒,对应表达宿主如BL21 对于动物和植物来说也可以用质粒来做载...
原核
表达载体
序列如何分析,从哪个启动子开始翻译分析?
答:
简要的说,
pet
系统的T7启动子最著名,以pet系列来说,找到启动子之后,再找rbs区域,这个是核糖体结合区,找到了之后,从离rbs最近的一个Met开始翻译,3个碱基为一个读码框,遇到UAA,UGA,UAG之后翻译结束,
载体
一般都由终止密码子,有时候也在引物里人为添加终止子,还有不明白的可继续问,
克隆
载体
不是不能够
表达
外源基因吗 没有sd序列,但是为什么它能够表达自 ...
答:
克隆载体目的在于复制足够多的目标质粒,所以常带有较强的自我复制元件,如复制起始位点等,往往在菌体内存在多拷贝,所以抽质粒会抽出一大堆。但不具备
表达元件
。而表达质粒有复杂的构成,为的是控制目标蛋白的表达,如各种启动子(T7),调节子(LacZ)等,而且以
pET
为代表的
表达载体
在菌体内都是低拷贝...
pet
28a和pet30a
载体的
区别
答:
pet
30a质粒类型是大肠杆菌蛋白表达,表达水平较高,克隆方法是多克隆位点,限制性内切酶;载体大小是5422 bp。pet - 28a载体shibiaodazaitima是
表达载体
,理论上影响是比较大的,原核lb培养不加抗生素的话,很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌的生长速度快得多的情况。最后的结果就是影响...
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