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shrna质粒构建
shrna
是什么原理
答:
将shrna构建到plko.1的质粒中,
将质粒转染进细胞,在细胞质中,质粒就是转录出一段与目的基因互补的单链rna
。此时这条互补rna与目的基因的mrna互补结合后,会特异性的将目的基因的mrna降解,从而使目的基因翻译的模板减少,达到敲低目的基因的效果。类似的基因干扰系统还有rnai,aso等。shrna的概况如下:...
shRNA
慢病毒载体合成步骤
答:
要进行shRNA载体构建,
首先需要根据自己的基因,设计出对应的 靶点 、 loop序列 , 酶切位点序列
,详见 LncRNA的shRNA慢病毒载体引物设计 - 引物先用10000g在4°离心2min,再按照说明书的要求,加入DEPC或者无酶ddH2O将寡核苷酸稀释为100 μM。按以下体系配制 退火反应体系 :无酶ddH2O补足 20 μ...
shRNA
真核表达载体
构建
YRBIO-shRNA表达系统
答:
在RNA干扰实验中,关键的步骤包括靶位点选择和
shRNA
表达载体
构建
。正确选择靶位点和高效构建载体能极大提升实验效果,反之则可能浪费资源。shRNA表达载体构建完成后,通常可以作为YRBIO腺病毒包装系统中的穿梭载体,对于转染效率低的细胞,可以直接采用这些载体包装腺病毒进行感染。市面上的免费软件在靶位点选择...
shrna
是怎么敲降目的基因的
答:
基因研究中,敲除基因,研究该基因的功能是最常用的套路。一般 ShRNA 可通过 RNA 干扰来抑制基因的表达, 是基因研究中必不可少的环节。下面就主要围绕设计 ShRNA 引物序列,手把手教你
构建
ShRNA 质粒
,轻松敲基因。ShRNA 的设计原则 1. 克隆到 ShRNA 表达载体中的 ShRNA 包括两个短反向重复序列...
shRNA
真核表达载体
构建
TRC及TRC shRNA库
答:
其目标是在未来三年内,
构建
出覆盖人类和小鼠基因的庞大
shRNA
库,具体计划是每种生物总计15,000个基因的shRNA克隆。TRC的首批成果已经发布,包含了第1版的shRNA文库,计有35,000个克隆,其中人类基因的shRNA有5,300个,小鼠基因的shRNA则有2,200个。值得注意的是,TRC会持续进行新的克隆构建工作,每...
shRNA
实验步骤
答:
b.混合慢病毒载体
质粒
,目的质粒 In polypropylene microfuge tubes (do NOT use polystyrene tubes), make a cocktail for each transfection: 1 μg pLKO.1
shRNA
plasmid 750 ng psPAX2 packaging plasmid 250 ng pMD2.G envelope plasmid to 20 μl serum-free OPTI-MEM c....
shRNA
真核表达载体
构建
的原装进口shRNA表达系统
答:
此
shRNA
数据库亦有一套原装进口的shRNA表达系统相匹配,针对每个基因的一套shRNA序列均已
构建
至相应的shRNA表达载体上,可直接使用,整套产品均为原装进口。此系统中,装载shRNA序列的真核表达载体,同时也是YRBIO第三代慢病毒包装系统中的穿梭载体。也就是说,如果目的细胞
质粒
转染效率较低,那么只需...
如何设计连接到
质粒
载体上的
shRNA
序列,查的文献序列看不明白
答:
应该不是输入错误。GATCC是故意设计的,这样正确连接上
shRNA
的
质粒
就不会被BalII切断,可以以此来验证shRNA有没有被连接上(自连的质粒会被BglII切断成linear的通过跑胶就能看出区别
小白求助:
shRNA质粒
稳转细胞一般能转几个进去
答:
两种
质粒
是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如
构建
腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞...
shRNA
在
质粒
中?和cDNA有什么区别,详细讲一下吧。我的qq378997276.非常感 ...
答:
shRNA
是指一种发卡结构的RNA, 可以被Drosha识别剪切,进一步加工后形成miRNA或siRNA进行RNAi过程,一般可以将其基因序列连接到
质粒
中转入细胞,多用于siRNA的过表达。cDNA是指从细胞中提取总RNA后将其反转录所得到的DNA,与原来的基因序列相比,cDNA只包含编码区的序列。
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