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原核表达实验步骤
目的蛋白有跨膜区,在
原核
中怎样克隆
表达
答:
实际上真核生物的蛋白也可以用真核细胞蛋白表达系统来实现,而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化的蛋白性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。
一个
原核表达实验
大概需要做多久
答:
从那一步做起呢? 还有你
表达
了要做什么体外
实验
呢?构建+测序=1-2周,转化+诱导表达=<1周,各种调试各种意外另算。。。
我想使目的基因过
表达
,
实验
应该如何进行?最好详细地讲一下
步骤
,多谢了...
答:
1、首先选择高拷贝的质粒载体;2、将目的基因进行改造,尽量避免工程菌的稀有密码子,在
表达
质粒之前设置高效的启动子;3、链接载体与目的基因 4、导入所选择的工程菌,进行培养 5、检测表达量 如果还是太低,你就要看看是否存在抑制物或负调控等 ...
真核基因在
原核
细胞中
表达
需要解决哪些问题
答:
第一,克隆到
原核表达
系统中的序列必须是去掉内含子的cDNA序列.因为原核表达系统没有剪切修饰内含子的相关酶系统.第二,要用原核的启动子.检查一下真核基因密码子偏好是否存在原核表达系统的稀有密码子.那个稀有密码子的氨基酸会成为表达量的瓶颈.如果有,点突变之.第三,真核基因可能在
表达过程
中需要有分子...
原核表达
的意义
答:
真核基因组比
原核
大得多,结构更复杂,含有许多重复序列,基因组的大部分序列不是为蛋白质编码的,而为蛋白质编码的基因绝大多数是不连续的。真核生物基本上是采取逐个基因调控
表达
的形式。真核基因表达调控的环节更多,转录前可以有基因的扩增或重排,并涉及染色质结构的改变、基因激活
过程
。转录后调控的方式也很多,但...
真核基因在
原核
细胞中
表达
需要解决哪些问题
答:
第一,克隆到
原核表达
系统中的序列必须是去掉内含子的cDNA序列.因为原核表达系统没有剪切修饰内含子的相关酶系统.第二,要用原核的启动子.检查一下真核基因密码子偏好是否存在原核表达系统的稀有密码子.那个稀有密码子的氨基酸会成为表达量的瓶颈.如果有,点突变之.第三,真核基因可能在
表达过程
中需要有分子...
真核生物基因的转录
过程
和调控方式有哪些
答:
的科学家已经认识到,转录水平调控是大多数功能蛋白编码基因
表达
调控的主要
步骤
。关于这一调控机制,现有两种假说。一种假说认为,真核基因与
原核
基因相同,均拥有直接作用在RNA聚合酶上或聚合酶竞争DNA结合区的转录因子,第二种假说认为,转录调控是通过各种转录因子及反式作用蛋白对特定DNA位点的结合与脱离引起染色质构象的...
原核表达
的蛋白用什么方法纯化?
答:
可以利用tag进行亲和纯化,也可以利用DEAE、分子筛之类的手段。
真核基因在
原核
细胞中
表达
需要解决哪些问题
答:
第一,克隆到
原核表达
系统中的序列必须是去掉内含子的cDNA序列.因为原核表达系统没有剪切修饰内含子的相关酶系统.第二,要用原核的启动子.检查一下真核基因密码子偏好是否存在原核表达系统的稀有密码子.那个稀有密码子的氨基酸会成为表达量的瓶颈.如果有,点突变之.第三,真核基因可能在
表达过程
中需要有分子...
为什么RNA合成的速度
原核
生物为25~50个核苷酸/秒,?
答:
为什么RNA合成的速度
原核
生物为25~50个核苷酸/秒,?RNA合成的速度之所以比较慢,是因为原核生物中RNA合成
过程
需要依赖于复杂的机制和大量的参与者。这些参与者包括DNA复制、mRNA剪切、tRNA识别、rRNAS
表达
以及其它一些修饰
步骤
,而这些步骤都会影响整体的速度。
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