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原核表达载体的必备条件
原核
蛋白
表达
,总是在沉淀中,怎么解决
答:
应该是
原核表达
宿主菌比较准确 原核表达宿主菌之前可以表达蛋白,放一段时间不表达蛋白原因很多 首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒
载体
,
表达条件
等等 原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成蛋白表达变少或者不表达。
真核或
原核
基因的启动子能不能被转录
答:
不能。启动子(Promoter) 位于结构基因上游,就是连接在基因5’端上游的DNA序列,其长度从100 bp到200 bp不等,是转录起始时RNA聚合酶识别、结合和启动转录有关的一段特殊DNA顺序,其本身并不被转录。
请问现在
原核表达
质粒
载体
(比如PET载体)的价位大约是多少?可以去那些公 ...
答:
第一个,你可以找一找你的师兄弟有没有,再找一找同学有没有?如果有的话就省了这笔钱。或者用你们手头现有的质粒去换。如果没有,可以找一些国内的公司去买,因为一些不好明说的原因,国内一些公司也有一些。这样会便宜一些。如果放心不下,那就如楼上说的,去Merck/Novagen公司购买,当然这价格...
以前养的菌
表达的
蛋白不一样了
答:
首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒
载体
,
表达条件
等等。
原核表达
宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成蛋白表达变少或者不表达。
表达载体
与克隆
载体的
优缺点?那个是较理想的载体?如何设计》?_百度...
答:
克隆载体大多是高拷贝的载体,表达载体有的是高拷贝的,有的是低拷贝的,各有各的用处,没法比较优缺点;如果你想做基因表达研究的话,当然得选择表达载体了;至于怎么选择怎么设计就要看你是做原核还是真核表达了,表达载体分
原核表达载体
和真
核表达载体的
,好像有个叫做pCDNA3.1的载体是通用的表达载体...
shRNA慢病毒
载体
合成步骤
答:
取连接产物与30ul 感受态细菌(对于 慢病毒载体 ,最好选择 stable3菌株 ,更有利于质粒稳定;而对于
原核表达的载体
,最好选择Rosetta菌株)混匀后 冰浴30min , 42℃热激90s ,立即置 冰上放置5min ,加入预热至室温的700ul LB培养基, 37℃恒温培养30min,吸取 200ul的菌液,用移液器混匀后...
基因工程需要哪些常见
载体
,都具有什么抗性?
答:
有真核的,如:pEGFP-N1(卡那抗性)、pCMV-myc(氨苄抗性)、pCDNA系列、pBUDCE4(博来霉素抗性)
原核表达载体
如:pGEX系列(pGEX-5X-3、pGEX-4T-1等,一般是氨苄抗性)、pET系列(有氨苄的有卡那的)还有原核、真核都表达的穿梭载体,看你要什么样的了 ...
cDNA方面的一些疑问
答:
没有区别。从同一段cDNA扩增得到的DNA片段既可以克隆入
原核载体
,在
原核
细胞中
表达
,也可以克隆入真核载体,在真核中表达。不过,为了提高在真核细胞中的表达效率,可以在紧邻起始密码子前面加一个六个碱基的kozak序列(通常使用GCCACCATG,ATG就是起始密码子)。如果表达效率还是不能满足要求,可以考虑把...
高中选修一生物重要知识点总结
答:
②原理:在盐酸酸化
条件
下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。 高中生物选修三知识点 基因工程的基本操作程序 第一步:目的基因的获取 1. 目的基因是指: 编码蛋白质的结构基因 。 2.
原核
基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法...
构建基因
表达载体
中启动子是来自质粒(非得来自
原核
生物)吗?
答:
是的,只需要插入目的基因,有点时候优化
表达
效率可能会涉及更换合适的启动子,这要看具体的情况再定。
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