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大肠杆菌常用表达载体
荧光蛋白在
大肠杆菌
中的
表达
的实验过程级结果
答:
用PcR方法从质粒pDsRed2-1中扩增获得DsRed2,亚克隆到pMD19-T载体上,然后酶切将DsRed2分别插入到原核
表达载体
pET-Trx和pGEX-4T1上,转入E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达.在LB平板培养基上或液体培养基中直接观察菌体颜色,最后用SDS-PAGE检测DsRed2蛋白的表达.结果显示构建的重组载体pET-Trx-Ds...
pbad 系列
载体
用什么
大肠杆菌表达
蛋白
答:
(1)构建基因
表达载体
时,需要用限制酶BamH I切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒,再用DNA连接酶将目镜基因和质粒连接形成重组质粒,再与
大肠杆菌
感受态细胞混合.因为重组质粒含有氨苄青霉素抗性基因,所以最后将混合物接种在含有氨苄青霉素平板培养基上培养,以筛选含有重组质粒的大肠杆菌.(2)①第1组...
如何以
大肠杆菌
质粒DNA为
载体
克隆一个编码蛋白的基因,并使之在大肠杆菌...
答:
一般程序如下: 获得目的基因-准备
表达载体
-将目的基因插入表达载体中 (测序验证)-转化表达宿主菌-诱导靶蛋白的表达-表达蛋白的分析-扩增、 纯化、进一步检测。 [主要试剂 主要试剂] 主要试剂 1、LB 培养基。 2、 100mM IPTG (异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2.38g IPTG 溶于100ml ddH2O ...
什么是蛋白质
表达
系统
答:
有的表达系统中还包括了协助
载体
进入宿主的辅助成分。比如昆虫-杆状病毒表达体系中的杆状病毒。 编辑本段蛋白表达系统分类及优劣分析 原核蛋白表达系统既是最
常用
的表达系统,也是最经济实惠的蛋白表达系统。原核蛋白表达系统以
大肠杆菌表达
系统为代表,具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点,...
为什么
大肠杆菌
是目前应用最广的外源基因
表达
体系
答:
遗传背景清楚;培养周期短;目标基因表达水平高;抗污染能力强;代谢途径和基因表达调控机制比较清楚;已有大量可供选择利用的
表达载体
。1. 对
大肠杆菌
的遗传背景和生理特性研究已相当彻底,已有很多不同抗药性、不同营养依赖型和不同校正突变型的菌种供选择应用,可以根据不同的载体而选择不同的菌种;2. ...
如何以
大肠杆菌表达
系统克隆并表达一个编码动物激素的基因?实验设计题...
答:
你得先把该基因的序列连接到
表达载体
上(如PGEX或PET系列载体),经验证后再转入到表达菌株中如(BL21),再挑单菌落,摇个种子液,在结种,培养到合适的OD值后,加IPTG诱导,再培养段时间(约2-4小时),离心收集菌体,PBS悬浮,超声波破碎,离心,沉淀和上清分别电泳(同时还得加个对照,如没有...
设计一个实验,构建一个用
大肠杆菌表达
拟南芥基因 MS2的
载体
。
答:
浓度高转化效率高)4.加A尾(是否加尾依酶而定),4℃连接过夜(可变)5.
大肠杆菌
感受态细胞转化涂板37℃过夜(~12h)6.挑单菌落做菌落PCR验证,另外取P出来的分别37℃摇菌培养过夜 7.提质粒,进行酶切验证,选一或两个阳性的单克隆送公司测序 8.测序结果完全正确后,
表达载体
构建成功 ...
大肠杆菌
是什么?
视频时间 01:29
请问什么是穿梭质粒
载体
和
表达
质粒载体?
答:
穿梭质粒是指可以在多种宿主下复制。比如说通常能够在哺乳动物,酵母或者其他细菌复制
表达
的质粒,同时可以在
大肠杆菌
内复制。这样利于对质粒的分子生物学操作和大量制备。表达质粒就是指带有启动子,增强子等等,使其在宿主体内不仅仅是可以复制,还能够通过转录翻印,在宿主内表达出相应蛋白的质粒 ...
常用
的体外转录
载体
(带T7启动子的)有哪些
答:
通过
大肠杆菌表达
目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒
载体
上,受噬菌体T7强启动子控制;表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。当需要表达蛋白时,在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列,在...
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