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真核细胞蛋白表达纯化
在大肠杆菌中
表达真核蛋白
要注意什么
答:
大肠杆菌属于原
核表达
系统,不具有翻译后修饰的功能,也就是不能做糖基化之类的修饰。要注意
真核蛋白表达
出来可能和在真核表达系统表达出来的有差异,非常有可能错误折叠成包涵体表达。不具有
生物
学活性。而且大肠杆菌系统和酵母,哺乳动物
细胞
系统对于密码子的偏好也不一样,所以表达不出来的可能性也很大。
简述原核细胞与
真核细胞
基因
表达
的差异
答:
1、原核生物染色体为一个基因连锁群,而真核为两个或以上,当一个有缺陷时另一个可以补充;2、原核生物染色体不与组
蛋白
结合,省去的解聚的步骤;3、原核生物的转录与翻译都在同一区间,而真核是分开的;4、
真核生物
基因内有内含子,mRNA会有一个自我剪接的修饰过程,原核生物则不会;5、真核...
简述原核和
真核细胞
在
蛋白质
翻译过程中的差异。
答:
在此过程中,需要ATP提供能量。(6)延伸因子不一样:原核生物每次反应需要3个延伸因子,EF-Tu、EF-Ts及EF-G。
真核生物细胞
需要EF-1及EF-2。(7)终止因子不同:细菌内部存在3种不同的终止因子,分别是RF1、RF2和RF3;真核细胞只有一个终止因子eRF。[考点]原核和
真核细胞蛋白
质翻译过程的比较。在...
大肠杆菌在
表达
糖
蛋白
时无法糖基
答:
而在大肠杆菌表达的非糖基化
蛋白
常常会聚集成不溶性的包涵体。一方面,包涵体中的蛋白是没有生物活性的,需要通过后续的溶解、
纯化
、复性等使其变成有生物活性的蛋白;另一方面,一些糖蛋白在去除糖链后尽管仍具有一定的生物活性,但是易被蛋白酶降解。因此,
真核细胞表达
的干扰素需要糖链来稳定结构、帮助溶解, ...
真核细胞
核糖体中的
蛋白质
在何处合成?
答:
核糖体中的
蛋白质
在细胞质中合成。
真核细胞
的核糖体的大小亚基是在核中形成的,在核仁部位rDNA经RNA聚合酶Ⅰ转录出45SrRNA(纤维部的纤维状物质),是rRNA的前体分子,与胞质运来的蛋白质结合形成RNP复合体,45SrRNA甲基化以后经RNA酶裂解为2个分子,18SrRNA和32SrRNA,后者再裂解为28SrRNA的5.8S...
重组基因为什么可以在
真核细胞
中
表达
答:
真核细胞
转化中,外源(重组)基因都是要先整合到真核细胞的染色体上,然后才会
表达
。也就是说,外源基因的转录过程也是在
细胞核
中完成的。例如最常用的酵母表达系统,导入酵母体内的重组表达载体只有和酵母染色体上的同源区发生重组(同源区等等都是载体上预先设计好的),整合到染色体上,外源基因才能够...
DNA与
蛋白质
相互作用的研究方法有哪些
答:
染色质免疫共沉淀技术(ChIP)
真核生物
的基因组DNA以染色质的形式存在.因此,研究
蛋白质
与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因
表达
机制的基本途径.染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法.它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物...
真核细胞
转染后
蛋白
不
表达
是怎么回事
答:
转染效率可能太低 启动子在宿主
细胞
中是否合适 检测
蛋白
的方法是否得当 你的construction是否有问题
为什么可以用大肠杆菌生产干扰素
答:
另一方面,糖链对
蛋白
的稳定性和半寿期(half life,一种物质其质量的一半被代谢或排出所需的时间)有一定的影响,一些糖蛋白在去除糖链后虽然仍具有一定的生物活性,但是易被蛋白酶降解。因此,
真核细胞表达
的干扰素需要糖链来稳定结构、帮助溶解,并通过转运系统分泌到细胞外,进入血液循环系统,以发挥其...
为什么构建的
真核表达
载体在
真核细胞
中不表达
答:
有的时候在不同的表达体系里面对
蛋白
的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候,一些蛋白在
真核表达
体系中表达量极低。去除信号肽序列值后,直接表达成熟肽,表达水平明显提高。所以说构建的真核表达载体高表达mRNA却检测不到目的蛋白是完全有可能的。
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