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蛋白表达与纯化服务
SDS-PAGE相关知识
答:
十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)作为聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的一种,可测定蛋白质的分子量,对蛋白质组分进行分离、分析、
纯化
、定性、定量以及少量的制备。在
蛋白表达
中有着广泛应用,尤其是在 大肠杆菌表达系统 中,有着不可替代的作用。 (
服务
请咨询)1.SDS-PAGE的类型 在SDS-PAGE中...
...蛋白时常用
蛋白质
变性和复性方法来
纯化蛋 白质
,为什么
答:
拌、震荡等。化学因素有强酸、强碱、尿素、胍盐、去污剂、重金属盐(如 Hg2+、Ag+、Pb2+ 等)三氯乙酸,浓乙醇等。不同
蛋白质
对各种因素的敏感程度不同。蛋白质变性后许多性质都发生了改变,主要有以下几个方面:(一)生物活性丧失 蛋白质的生物活性是指蛋白质所具有的酶、激素、毒素、抗原与抗体...
IPTG诱导
蛋白表达
的原理及实验步骤
答:
启动转录。因此,真正的诱导并非乳糖,而是通过IPTG间接实现的。在实验中,IPTG是常用的选择,因其高效且易于操作。要进行IPTG诱导
蛋白表达
,通常的步骤包括基因转染、细胞培养、添加IPTG诱导、以及后续的蛋白检测
和纯化
。理解这些原理有助于优化实验条件,确保目标蛋白的有效表达。
如何使外源
蛋白
在原核系统高效、可溶性
表达
且易于
纯化
?
答:
用 GST 或者 MBP这种成熟的系统 应该适用于大部分
蛋白
蛋白表达
系统的植物表达系统
答:
总之,各种表达系统各有优缺点,使用大肠杆菌表达系统能够在较短时间内获得表达产物,且所需的成本相对较低;但目的蛋白常以包涵体形式表达,产物
纯化
困难,且原核表达系统翻译后加工修饰体系不完善,表达产物的生物活性较低。酵母和昆虫细胞表达系统
蛋白表达
水平高,成本低,但翻译后加工修饰体系与哺乳动物不...
...蛋白时常用
蛋白质
变性和复性方法来
纯化蛋 白质
,为什么
答:
天然
蛋白质
的空间结构是通过氢键等次级键维持的, 而 变性后次级键被破坏, 蛋白质分子就从原来有序的卷曲的紧密结构变为无序的松散的伸展状 结构(但一级结构并未改变)。所以,原来处于分子内部的疏水基团大量暴露在分子表面, 而亲水基团在表面的分布则相对减少, 至使蛋白质颗粒不能与水相溶而失去...
怎么利用层析法
纯化
酶如何确定目的
蛋白
?
答:
层析法
纯化
酶介绍:Protein A,Protein G和Protein L是三种细菌
蛋白
,因其与抗体的高效结合而被大家所熟知。这些蛋白经过基因工程编辑重组
表达
,通常用于从各种不同物种中进行关键抗体类型的亲和纯化。动脉硬化症、高血脂及糖尿病等。鉴于α淀粉酶抑制剂的重要生物学功能,许多学者对不同来源的α淀粉酶抑制...
一文读懂亲和层析标签技术
答:
His标签,以其小分子量、高通用性和结合特异性,是高通量
纯化蛋白
的首选。GST标签则通过与还原型谷胱甘肽的特异性结合,用于大范围的融合
蛋白表达与纯化
。MBP标签通过与麦芽糖结合增加蛋白溶解性,适用于难
表达蛋白
的纯化。FLAG标签利用与抗-FLAG抗体的结合,方便免疫吸附纯化,而Strep II标签依赖streptavidin...
求助
蛋白表达
中的his标签的作用
答:
便于
纯化
该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的目的。也就是在表达载体上面,特别加六个组氨酸的碱基序列,目的就是纯化。………更多具体材料请参考:
蛋白表达
http://product.bio1000.com/100182/ ...
表达纯化蛋白
过程中出现一条条带略小的非目的蛋白,且同样带有组氨酸标签...
答:
你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸标签的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂
蛋白
,也可能目的蛋白部分降解。要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到。可能试试再加一步甚至多步层析步骤以期得到高纯度的蛋白。可以选择的层析方法推荐使用反向、离子交换。
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