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载体构建不出来
载体构建
中,引物设计序列与克隆测序不一致,向您请教!
答:
第一个问题,只有一个碱基缺失,克隆测序和引物合成都没有问题;第二个问题:酶切连接入
载体
后,克隆过程就完成了;第三个问题:如果你说的是转化过程的话,应该是先做好连接,再做转化。
构
载体
总是少一段怎么回事
答:
出现了操作失误,导致某一段序列没有被正确地插入到构
载体
中。2、测序误差:
构建
好的构载体需要进行测序,有时会出现测序误差,导致测序结果不完整,缺失了某一段序列。3、数据处理问题:在数据分析和处理过程中,会出现某些数据被误判或者漏掉的情况,导致构载体序列缺失了某一段。
原核表达
载体
的
构建
要几天
答:
原核表达
载体
的
构建
要7天。根据查询相关资料信息,原核表达载体的构建下载缓慢,内部构成复杂,分三个模块进行逐一完成后才能整合,整个过程需要7天。
构建载体
时为什么用双酶切而不用但酶切
答:
有两个方面,一是
载体
本身酶切不充分,没有完全切开;二是去磷酸化不充分。
质粒
载体
的
构建
步骤
答:
则可保存菌种备⽤。 9、质粒提取:菌种⽐对成功,冻存菌种后,菌液⽤于提取质粒。⼀、
载体构建
基本原理 分、切、连、转、筛 1、分:分离出要克隆的⽬的基因及载体。2、切:⽤限制性内切酶切割⽬的基因和载体,使其产⽣便于连接的末端。...
载体构建
时,如何区分质粒是真核表达还是原核表达,二者的启动子分别有...
答:
这个做你就有点盲目了,我觉得你应该先确定你要原核表达,还是真和表达,确定后,在选择质粒。正如你所说
载体
是可以
构建
的,所以质粒作为载体,其启动子也是可以构建的,,现在实验室往往自己构建所需要的载体进行表达,就是我需要什么样的质粒,我就构建什么样的质粒。明白哇。质粒的启动子不同之处在于...
简述重组
载体构建
的原理和步骤
答:
1.获得目的基因,并进行酶切 获得粘性末端 2.将
载体
也进行酶切 获得相同的粘性末端 3.将载体与目的基因相连 4.将重组好的载体导入宿主细胞中进行表达 克隆的基本过程是先将含有遗传物质的供体细胞的核移 植到去除了细胞核的卵细胞中,利用微电流刺激等使两者融合为一体,然后促使这一新细胞分裂繁殖...
如果是将目的基因转入动物细胞,在基因表达
载体构建
这一步,用的是什么...
答:
常用的质粒有两种,一种是真核表达质粒,比如pcDNA3.1等,它们有真核启动子比如CMV,可以进行瞬时转染。另一种是病毒质粒,比如逆转录病毒质粒等,它们可以包装成逆转录病毒,整合到细胞基因组中,稳定地遗传并表达。但不论哪种
载体
,在
构建
的时候,一定是以质粒的形式进行的,否则无法操作。
基因表达
载体
的
构建
需要哪些工具酶
答:
限制性核酸内切酶或限制酶——比作剪刀 DNA连接酶——比作针线(包括T4DNA连接酶 热稳定DNA连接酶等) 楼上的说的不对 这还有几种酶的比较 有兴趣就看看 希望采纳 限制性核酸内切酶(以下简称限制酶):限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,...
载体构建
/质粒构建实验原理、方法、步骤
答:
多克隆位点(MCS)是包含数个限制性酶切位点的一段DNA序列,作为外源DNA的插入部位,是基因工程中常用的
载体
质粒的标准配置。MCS上含有多个单一酶切位点,每个位点通常只被一种酶识别并酶切,不同酶的酶切位点可有重叠。质粒
构建
包括原理、方式、步骤。原理依赖于酶的作用,对目的基因和载体DNA进行切割...
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