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镍柱纯化蛋白结合时间
蛋白纯化
中Ni会和NaOH反应吗
答:
会的,Ni离子和氢氧根离子会反应生成氢氧化镍沉淀。所以Ni
柱
需要先用EDTA螯合掉
镍
离子之后再用氢氧化钠冲洗,以避免生成沉淀物质堵塞柱子。但是单质镍不能与氢氧化钠反应,钴和镍不与强碱作用,因此镍坩埚可以用于熔融碱类物质。镍,近似银白色、硬而有延展性并具有铁磁性的金属元素,它能够高度磨光和抗...
纯化
后的
蛋白
在含有高浓度nacl的情况下浓缩容易沉淀吗
答:
我在
纯化
一种
蛋白质
时,也遇到过相同的情况,虽然蛋白质不同,但是也许能有帮助。
镍柱
后,用含 EDTA 的缓冲液透析,除去 Ni ,再过 DEAE 离子交换柱,之后透析再浓缩,分装小管,-80度保存。一次使用一支。理论上说蛋白质应在高浓度情况下保存,但当缓冲溶液中含有大量盐而且目的蛋白中含有大量输水...
有谁用
镍柱纯化
过GST标签
蛋白
吗?
答:
也许你的
蛋白
中有连续组氨酸或类似序列,与
镍柱
部分
结合
。也可能是没有洗干净。
蛋白纯化
问题,HIS标签,
镍柱纯化
,原先很好,但是近来目的蛋白明显便变成...
答:
说实话,看你这量挺大的,我觉得有可能是降解,或者是你这
蛋白
本身除了his标签,还带别的融合蛋白不?或者就是,胶有问题,但这个不像。。。要我,我就重做一遍,是不是你这蛋白对温度敏感啊?
镍柱纯化蛋白
为什么加pmsf和dtt
答:
PMSF为
蛋白
酶抑制剂,在纯化过程中,为了防止细菌本身的蛋白酶降解待纯化的目的蛋白,通常在破碎菌体,上柱的过程中会加PMSF。使用时请注意防护,有毒。DTT为二硫苏糖醇,一般加在平衡上柱缓冲液和洗脱缓冲液中,纯化的目的蛋白天然结构如果有二硫键,那么在纯化这类蛋白时,推荐加入DTT,但用
镍柱纯化
...
为什么用带HIS标签的
镍柱纯化
试剂盒
纯化蛋白
后包ELISA可以避免大肠杆...
答:
因为,
纯化
过程包括对大肠杆菌的裂解和对目标
蛋白
的纯化,经纯化后,大部分的杂质(杂蛋白、糖和核酸)都去除了,对ELISA的干扰小。如果不纯化,大肠杆菌本身是有众多生物分子的,这都是潜在的干扰性抗原。
his标签的
蛋白
,用
镍柱
6M盐酸胍变性
纯化
后,产率和浓度都不高,请高手指教...
答:
产率和你的表达有关,表达条件是否最佳,一般胞内比较高,胞外比较低
镍柱
是镍柱,6M盐酸胍是6M盐酸胍步骤,不能乱用的。再把问题描述的清楚一点。
镍柱纯化蛋白
反复使用
答:
请问您问的是
镍柱纯化蛋白
能反复使用吧。能反复使用。因为过柱后镍柱即可再次使用,但为防止蛋白的交叉污染,每根柱子最好只用于同种蛋白的纯化,所以镍柱纯化蛋白能反复使用。
蛋白纯化
方法有很多,像亲和层析,蛋白沉淀,缓冲液更换,离子交换色谱,疏水作用,排阻层析,电泳等。
在
纯化蛋白
时,镍离子有什么作用?
答:
镍柱纯化
his-tag protein是常用的方法。原理大概就是his上有咪唑杂环,这个环可以带有很多电子,可以与含正电的金属离子发生亲和反应。由于
蛋白质
是两性的,所以当pH变化时,带电也会发生变化,所以可以控制pH进行亲和/洗脱,从而纯化目的蛋白。
基因带六个his标签,
蛋白纯化
时为何挂不上
镍柱
求解
答:
zhaocy8903(站内联系TA)用其它
纯化
手段anik(站内联系TA)有可能是你的his 标签掉了,另一个就是你的
镍柱
没有还原彻底。wjswj(站内联系TA)曾经傻乎乎的用TE缓冲液溶
蛋白
去挂镍柱,结果……后来想想真好笑:)txstbbm(站内联系TA)这样呀,不变形的话也可以尝试做个活性蛋白电泳,然后切胶回收吧!peng...
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