我做分子实验，PCR以后电泳监测空白对照居然有亮条带出现，一开始以为是污染，可以连续几次做都是这种情况

该出来的条带一直出不来，而空白对照一直又没有，好奇怪，求高人指点

推荐答案 2012-10-23

有很多情况啊，像一楼说的，引物二聚体也可能，不过引物二聚体的位置在marker的末端，会比较模糊，比阳性对照的条带要粗。你可以截个图上来，让大家看看其他泳道上的带是什么情况。如果空白对照的亮带在别的泳道里也有，就是污染了，做PCR体系用的水很容易被污染，我的引物也有过污染的时候，电泳液里也可能留下跑胶时跑出去的核酸物质。不知道你P的是质粒，菌液，cDNA，还是细胞培养经过处理的产物。追问

是提取茶叶中微生物的真菌和细菌的DNA，这个是细菌的，最右边那个是空白，导师出差，也指导不了

追答

你图上一条暗红色，一条蓝色的带是buffer显的吧，一般正常的核酸带都是在两条buffer之间的，从这张图看，有很多带的那个泳道好像是marker吧，似乎跑的不太对，marker都会长于buffer显蓝色的带，我之前是做动物的，marker范围一般从10000到200，带有10条。不知道你提取的时候使用的是自己配的试液还是试剂盒提取的，看空白对照的那个带肯定有问题，如果是0.8-1%琼脂糖凝胶，220V以下的电压，跑15-20分钟的话，还停留在加样孔附近的带很有可能是细菌的蛋白残留，不知道你提取的时候使用的是自己配的试液还是试剂盒提取的，植物手提很容易做不出条带，可以换试剂盒试试，如果你真的想知道你空白对照里出现的是什么，可以进行胶回收，然后送测序或者连载体之类的，我以前也遇到过这种情况，结果胶回收产物连完载体都是空载体，然后我就把从提取到pcr，到跑胶的东西都换了。嗯，你们植物是有不一样的要求么？我们核酸琼脂糖凝胶电泳都是用黑白图的。我看报刊杂志也都是黑白灰色的。就上学的时候提过一次植物DNA，以后都做动物的了，回答的不够专业啊，你可以问问师兄师姐们，或者是给你们提供试剂的公司的技术服务。别耽误实验进度了。传一张我以前的电泳图给你参考一下，最底下模糊的亮带是引物二聚体，阴性对照也有的，阳性对照明显亮于样品带，marker是2k的。加样孔看的也很清楚，中间两排黑色的带就是buffer。