如题所述
首先找一种正常的标签蛋白进行一下纯化试验，如果能够纯化出来那就是你的蛋白的问题，可能是蛋白在表达的时候非正常折叠，标签被折叠在内部，没有在蛋白表面游离着，这样的话当然不会被镍柱捕获了。比较严重的情况就是包涵体的形成，是否形成包涵体你可以根据蛋白的性质反应或者是电泳检测一下离心后的细胞破碎液上清和沉淀中目的蛋白的分布情况。如果形成包涵体那你就需要先使蛋白质尽可能的溶解了，可以加入一些变性剂，比如尿素。当标签暴露出来之后就比较容易挂柱了。
温馨提示：答案为网友推荐，仅供参考
第1个回答 2012-07-19
首先找一种正常的标签蛋白进行一下纯化试验，如果能够纯化出来那就是你的蛋白的问题，可能是蛋白在表达的时候非正常折叠，标签被折叠在内部，没有在蛋白表面游离着，这样的话当然不会被镍柱捕获了。比较严重的情况就是包涵体的形成，是否形成包涵体你可以根据蛋白的性质反应或者是电泳检测一下离心后的细胞破碎液上清和沉淀中目的蛋白的分布情况。如果形成包涵体那你就需要先使蛋白质尽可能的溶解了，可以加入一些变性剂，比如尿素。
第2个回答 2012-07-05
可能根本没表达出来
第3个回答 2012-07-11
用His抗体做个western blot，看你的标签表达没有，如果表达了那你就参考文献再优化一下结合条件和洗脱条件。
