如题所述
我不知道你所说的分子量特别小是指的表达的基因的分子量小还是表达产物的蛋白分子量小。不过一般无论DNA还是后面的蛋白都是可以看到的。一般如果要表达的DNA片段太小看不到的话基本上是做双酶切鉴定的时候会出现,因为片段太小会导致从载体上切下了的片段总的质量太小而染色看不清,这时只要增加原始酶切的质粒的量就OK了。如果是蛋白的话,这个和分子量大小其实没多大关系,一般分子量小的话,你需要根据你的蛋白预测大小来调整PAGE胶的浓度,选择合适的浓度胶来跑,不然你的蛋白会因为跑出胶而看不到。然后如果你的胶浓度正确的话(一般看和你蛋白对应的Marker是否跑出胶),还看不到蛋白带,那么只有可能是你的蛋白表达量低了或者根本没有表达,你需要1,更改诱导条件,提高蛋白表达量。2,质粒测序,看目标片段在装入载体的时候是否发生了移码错误。追问
非常感谢您的回复,我受益匪浅。我是诱导表达后,跑蛋白胶在蛋白Marker对应位置未看到目的条带,有可能表达量太低了。对了,我还想请教下您,PCR后测序回来,用正向引物测的,但只能反向对应目的基因序列,这能说明连接正确吗?
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