在做DNA提取的时候，蛋白酶K的浓度会影响实验结果吗

应该是有关系的 蛋白酶K的主要作用就是水解蛋白质的 可以将蛋白质与DNA很好的分离 如果蛋白酶的含量少的话 当然就会影响蛋白质的水解程度 所以 提出的DNA 的含量和纯度都会受到影响追问

就像我说的情况，是不是蛋白酶配的浓度不对那？我是拿移液枪仪的

追答

蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml
20mg/ml蛋白酶K配制标准：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。避免反复冷冻
你配的是2ug/ml　应该是浓度太低了

追问

谢谢，但是为什么琼脂糖凝胶电泳的时候给别人看说蛋白质太多了，是不是就是因为蛋白酶K的浓度低，所以才会出现这样的现象，而且DNA几乎没跑出来

追答

别人说蛋白质太多了？ 他是怎么看到有蛋白是的条带的呢 你用的应该是EB给DNA染色的吧 看到的应该是只有DNA的条带呀 溴化乙啶 只和DNA结合镶嵌到DNA分子中的呀？ 这个我也很是不理解

追问

恩，就是用核酸染料染色的，不知道学姐是怎么看的，我也不懂。。。有点抓狂，因为昨天做了三十多个样，只有个别的三五个跑出来了，我在想是不是蛋白酶的问题，还是因为和我一起做实验的那个同学，在最后一步的时候没有把离心管里的东西倒干净直接加的TE，我们做的是鸡血

追答

其实 DNA的提取是很有难度的 因为这么大的分子量 很容易就会断裂的 即使再小心的操作有时候也是什么都提不出来的 不知道你的具体方法是什么 不过 我们一般最后一步都是用0.6倍的异戊醇来沉淀DNA 然后用70%的乙醇来洗DNA沉淀 然后自然干燥掉乙醇 再加入TE 这样的化就会去除一些杂质

追问

恩恩，对，就是和你的一样，中间不是还有一个是要把液体都到掉吗？能把QQ给我吗？我还有想不同的地方。

追答

我的邮箱guanjiawei1991@163.com

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