可溶性蛋白测定用什么缓冲液,用的是考马斯亮蓝法,急急急急!!!!具体怎么配的

如题所述

常规用PBS或Tris-HCl都可,其实要求不是这么严格,如果害怕缓冲溶液有影响,单独做个缓冲溶液的阴性对照就行了啊,用水溶最简单。追问

我用0.1mol/l的,ph=7.8的缓冲液,测出来的值有的0。8几,有的0.7几,是不是值太大了,是否缓冲液的问题,急急急急!!

追答

呵呵,我猜这个现象跟你缓冲溶液没有关系的,其实你只要掌握一个原则:样品一定要稀释到标准曲线的测定范围内才能用该标准曲线计算样品浓度的。
这个方法标准曲线就是以一定的蛋白浓度和其对应的吸光度值做标准曲线,然后把样品测定的吸光度值代入方程计算蛋白浓度。
这就是说你的标准曲线在你限定的蛋白浓度范围内与吸光度值呈线性关系,对应的有一个回归方程,那么你要用这个公式计算,你的蛋白吸光度也得稀释到这个对应的范围内,不然超过了这个范围,哪你就得另外做一组浓度的标准曲线了。明白了么?

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第1个回答  2012-09-19
一般情况下,只要溶液中不含大量的去污剂,基本都可以和考马斯亮蓝法兼容。
如果你的样品中,去污剂浓度太高了,就最好先稀释样品再测。
另外确认是否干扰的简单办法就是,用同样的溶液去稀释标准品,然后看标准曲线的R2值怎么样。如果R2值很理想的话,说明没有干扰,如果R2值一塌糊涂,吸光值和蛋白浓度没有任何关系的话,就得考虑赶紧稀释溶液或是换溶液了。
如果蛋白直接就是干粉,溶在PBS里面没有问题的。本回答被网友采纳
第2个回答  2012-09-19
PBS或Tris-HCl都可,可以看看上海生工的SK3041,SK3051,SK3021的说明书

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