如题所述
双元表达载体系统主要包括两个部分:
一部分为卸甲Ti质粒,这类Ti质粒由于缺失了T-DNA 区域,完全丧失了致瘤作用,主要是提供Vir基因编码表达Vir蛋白的功能,VIR基因编码的virD2蛋白相当于反式作用元件,能够识别农杆菌转运DNA(T-DNA)两端24bp序列,进而将T-DNA以单链的形式切割下来,同时,VIR基因编码的virE2能够与单链T-DNA结合,形成T-复合物,在核定位序列的作用下,经过宿主细胞T4SS转运体系进入宿主细胞质。之后便是宿主细胞的转运过程,激活处于反式位置上的T-DNA的转移。
另一部分则是含有T-DNA的微型质粒,它带有目的基因和大肠杆菌及农杆菌复制的起始位点,实际上是一种分子质量较小的大肠杆菌和农杆菌的穿梭载体。
双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的Vir基因可以反式激活T-DNA 的转移。
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