如题所述
如何根据蛋白的活性部位选择相应的抗体进行免疫荧光实验?
Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统,广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由8个亲水氨基酸(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)组成的多肽片断。FLAG标签只有8个氨基酸组成,因此它不会占据其他表位与结合域,避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点,FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面,因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。
由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端,这一系统已用于各种细胞类型,包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的,因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody 可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。比如在免疫荧光IF的实验里,同时配合EarthOx的Dylight 549荧光二抗,使用该抗体可以准确的定位出Flag融合表达蛋白在细胞内的位置(如图红色显示部分)。另外,做融合表达分析前,通过免疫共沉淀技术获得Flag融合表达蛋白也是非常重要的一步,因此选择一个合适的、可用于免疫共沉淀(Immunoprecipitation,IP)Flag标签抗体也是很必要的。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody不仅能应用于细胞内定位的IF实验,同样还能应用于IP实验。1:200甚至更高的IP实验稀释比率,也说明了该抗体本身的具有很高的效价,同时,因为是单克隆抗体,因此特异性也很高。高效价所对应的高稀释比率也意味着超高性价比。