PCR扩增的正反向引物的长度必须一致吗？

可以用，没有任何特别问题。
实际上，如果你用过一些引物设计的软件，有时候你会发现，软件设计出来的引物长度有可能不同（当然，大部分时候是相同的），这有可能是考虑的引物Tm，引物二聚体，引物非特异性结合等问题。除了一般引物设计所遇到的问题，长度不同不会引起额外的特别问题。

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