Western Blotting，我做了个His-tag的蛋白，大概11KDa大，怎么做出的Western有好几条带，明显的大很多？

a. 影响非特异性结合的因素很多，针对不同的免疫原，其封闭条件均可进行优化，没有通用的封闭液，因为每个抗原-抗体反应都具有独特的性质；
b. 在选择封闭物时，最重要的标准是信噪比，封闭条件不足，会导致过多的背景噪音，封闭条件过度，会造成信号变弱；
c. 可根据不同的检测系统（碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶）、蛋白质属性（分子量大小）选择适当的封闭物及缓冲液（PBS或TBS）追问

我用的是pET系统，将6His的特异性免疫原接到我的肽链上了，用PCR和DNAsequence都验证过了。我封闭了1个小时，比目标蛋白大的那些个条带很明显。感受态细胞用的是Rosetta,这种细胞不会本身就产含有6HIs的蛋白吧。还是有操作上的失误呢？空载体的阴性对照也有同样的条带出现了，是因为封闭的问题还是菌株的问题？

传的追问

你是说被污染了吗？我有做阳性对照，阳性对照本来没有这些条带的也有了。不过那个阳性对照是粗提产物，放了一周左右，有人说是不是被降解了。