如题所述
用于大肠杆菌的液体培养基：GYT培养基（Tung and Chow 1995）
- 10% (v/v) 甘油
- 0.125% (m/v) 酵母提取物
- 0.25% (m/v) 胰化蛋白胨
- 使用0.22μm滤器过滤除菌
- 分装成2.5ml一份，保存于4℃。
LB（Luria-Bertani）培养基
- 配制每升培养基，应在950ml去离子水中加入：
- 胰化蛋白胨 10g
- 酵母提取物 5g
- NaCl 10g
- 摇动容器直至溶质溶解。
- 用5mol/L NaOH (约0.2ml) 调pH值至7.0。
- 用去离子水定容至1L。
- 在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
M9培养基配制
- 1L培养基，应在750ml无菌去离子水（冷至50℃或50℃以下）中加入：
- 5×M9盐溶液 200ml
- 1 mol/L MgSO4 2 ml
- 适当碳源的20%溶液 (如20%葡萄糖) 20ml
- 1 mol/L CaCl2 0.1 ml
- 灭菌的去离子水至980ml。
- 如果需要，可在M9培养基中补加适当氨基酸和维生素的贮存液。
- 5×M9盐溶液配制：用无离子水溶解下列盐类，终体积为1L：
- Na2HPO4·7H2O 64g
- KHPO4 15g
- NaCl 2.5g
- NH4Cl 5.0g
- 分装成200ml一份，在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌15min。
- 分别配制MgSO4溶液和CaCl2溶液，高压灭菌。
- 用无菌水将5×M9盐溶液稀释至980ml后，加入MgSO4和CaCl2溶液。
- 葡萄糖溶液在加到稀释的M9盐溶液之前，用0.22μm滤器过滤除菌。
当使用含有染色体上脯氨酸生物合成操纵子液做缺陷 [△(lac-proAB)] 的大肠杆菌以及互补的 proAB 基因在 F' 质粒上时，在 M9 基本培养基中补加以下成分：
- 0.4% (m/v) 葡萄糖 (右旋糖)
- 5mM MgSO4·7H2O
- 0.01% 硫胺
NZCYM培养基配制
- 每升培养基，在950ml去离子水中加入：
- NZ胺 10g
- NaCl 5g
- 酵母提取物 5g
- 酪蛋白水解物 1g
- MgSO4·7H2O 2g
- 摇动容器直至溶质完全溶解。
- 用5mol/L NaOH (约0.2ml) 调pH值至7.0。
- 用去离子水定容至1L。
- 在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
- NZ胺：酪蛋白酶促水解物 (ICN Biochemicals公司)。
- NZCYM、NZYM和NZM也可用BD Biscienses公司的脱水培养基。
NZYM培养基
- NZYM培养基除不含酪蛋白水解物外，其他成分与NZCYM培养基相同。
NZM培养基
- NZM培养基除不含酵母提取物外，其他成分与NZYM培养基相同。
SOB培养基配制
- 每升培养基，在950ml去离子水中加入：
- 胰化蛋白胨 20g
- 酵母提取物 5g
- NaCl 0.5 g
- 摇动容器使溶质完全溶解。
- 加10ml 250mmol/L KCl溶液 (将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。
- 用5mol/L NaOH调pH值至7.0。
- 用去离子水定容至1L。
- 在15 psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
- 该溶液在使用前，加入5ml灭菌的2 mol/l MgCl2 [2mol/L MgCl2溶液的配制方法如下：用90ml去离子水溶解19g MgCl2，用去离子水调整体积至100ml，在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min]。
SOC培养基
- SOC培养基除含有20mmol/L葡萄糖外，其他成分与SOB培养基相同。
- SOB培养基经高压灭菌后冷至60℃或60℃以下，加20ml除菌的1mol/L葡萄糖溶液 (1mol/l葡萄糖溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解18g葡萄糖，完全溶解后，用去离子水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌)。
Terrific肉汤 (又称TB培养基，Tartof and Hobbs 1987) 配制
- 每升培养基，在900ml去离子水中加入：
- 胰化蛋白胨 12g
- 酵母提取物 24g
- 甘油 4ml
- 摇动容器使溶质完全溶解。
- 然后在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
- 当溶液冷至60℃或60℃以下时加入100ml无菌的0.17mol/L KH2PO4，0.72mol/L K2HPO4溶液 [该溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解2.31g KH2PO4和12.54g K2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100ml并在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
2×YT培养基配制
- 每升培养基，在900ml去离子水中加入：
- 胰化蛋白胨 16g
- 酵母提取物 10g
- NaCl 5g
- 摇动容器直至溶质溶解，用5N NaOH调pH值至7.0。
- 用去离子水定容至1L。
- 在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
- 10% (v/v) 甘油
- 0.125% (m/v) 酵母提取物
- 0.25% (m/v) 胰化蛋白胨
- 使用0.22μm滤器过滤除菌
- 分装成2.5ml一份，保存于4℃。
LB（Luria-Bertani）培养基
- 配制每升培养基，应在950ml去离子水中加入：
- 胰化蛋白胨 10g
- 酵母提取物 5g
- NaCl 10g
- 摇动容器直至溶质溶解。
- 用5mol/L NaOH (约0.2ml) 调pH值至7.0。
- 用去离子水定容至1L。
- 在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
M9培养基配制
- 1L培养基，应在750ml无菌去离子水（冷至50℃或50℃以下）中加入：
- 5×M9盐溶液 200ml
- 1 mol/L MgSO4 2 ml
- 适当碳源的20%溶液 (如20%葡萄糖) 20ml
- 1 mol/L CaCl2 0.1 ml
- 灭菌的去离子水至980ml。
- 如果需要，可在M9培养基中补加适当氨基酸和维生素的贮存液。
- 5×M9盐溶液配制：用无离子水溶解下列盐类，终体积为1L：
- Na2HPO4·7H2O 64g
- KHPO4 15g
- NaCl 2.5g
- NH4Cl 5.0g
- 分装成200ml一份，在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌15min。
- 分别配制MgSO4溶液和CaCl2溶液，高压灭菌。
- 用无菌水将5×M9盐溶液稀释至980ml后，加入MgSO4和CaCl2溶液。
- 葡萄糖溶液在加到稀释的M9盐溶液之前，用0.22μm滤器过滤除菌。
当使用含有染色体上脯氨酸生物合成操纵子液做缺陷 [△(lac-proAB)] 的大肠杆菌以及互补的 proAB 基因在 F' 质粒上时，在 M9 基本培养基中补加以下成分：
- 0.4% (m/v) 葡萄糖 (右旋糖)
- 5mM MgSO4·7H2O
- 0.01% 硫胺
NZCYM培养基配制
- 每升培养基，在950ml去离子水中加入：
- NZ胺 10g
- NaCl 5g
- 酵母提取物 5g
- 酪蛋白水解物 1g
- MgSO4·7H2O 2g
- 摇动容器直至溶质完全溶解。
- 用5mol/L NaOH (约0.2ml) 调pH值至7.0。
- 用去离子水定容至1L。
- 在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
- NZ胺：酪蛋白酶促水解物 (ICN Biochemicals公司)。
- NZCYM、NZYM和NZM也可用BD Biscienses公司的脱水培养基。
NZYM培养基
- NZYM培养基除不含酪蛋白水解物外，其他成分与NZCYM培养基相同。
NZM培养基
- NZM培养基除不含酵母提取物外，其他成分与NZYM培养基相同。
SOB培养基配制
- 每升培养基，在950ml去离子水中加入：
- 胰化蛋白胨 20g
- 酵母提取物 5g
- NaCl 0.5 g
- 摇动容器使溶质完全溶解。
- 加10ml 250mmol/L KCl溶液 (将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。
- 用5mol/L NaOH调pH值至7.0。
- 用去离子水定容至1L。
- 在15 psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
- 该溶液在使用前，加入5ml灭菌的2 mol/l MgCl2 [2mol/L MgCl2溶液的配制方法如下：用90ml去离子水溶解19g MgCl2，用去离子水调整体积至100ml，在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min]。
SOC培养基
- SOC培养基除含有20mmol/L葡萄糖外，其他成分与SOB培养基相同。
- SOB培养基经高压灭菌后冷至60℃或60℃以下，加20ml除菌的1mol/L葡萄糖溶液 (1mol/l葡萄糖溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解18g葡萄糖，完全溶解后，用去离子水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌)。
Terrific肉汤 (又称TB培养基，Tartof and Hobbs 1987) 配制
- 每升培养基，在900ml去离子水中加入：
- 胰化蛋白胨 12g
- 酵母提取物 24g
- 甘油 4ml
- 摇动容器使溶质完全溶解。
- 然后在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
- 当溶液冷至60℃或60℃以下时加入100ml无菌的0.17mol/L KH2PO4，0.72mol/L K2HPO4溶液 [该溶液的配制方法是：用90ml去离子水溶解2.31g KH2PO4和12.54g K2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100ml并在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
2×YT培养基配制
- 每升培养基，在900ml去离子水中加入：
- 胰化蛋白胨 16g
- 酵母提取物 10g
- NaCl 5g
- 摇动容器直至溶质溶解，用5N NaOH调pH值至7.0。
- 用去离子水定容至1L。
- 在15psi (1.05kg/cm2) 高压下蒸汽灭菌20min。
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