关于可溶性蛋白质的提取和鉴定

按照蛋白的提取方式提取就行了。一般有些步骤都是不变的，破碎--离心--提取
提取的话看你要提取的蛋白的性质进行选择。有电泳，盐析，HPLC。
提取后纯化该蛋白，可以采用凝胶柱进行分离，然后进行SDS-page,确定分子量大小，还可以进行蛋白测序。然后可以通过X光衍射确定蛋白结构。
具体蛋白质生物功能测定法举例:
1淀粉酶目的基因的鉴定：
淀粉酶能将淀粉水解为多糖或单糖。将难溶淀粉酶能将淀粉水解为多糖或单糖。将难溶于水
的淀粉加入固体培养基内，培养基呈混浊状。将待鉴定的重组克隆涂布在此培养基上，含目的基因的目的重组子可其表达的淀粉酶分泌出胞外，并均匀扩散，同时降解淀粉为可溶性
的多糖或单糖。因此，目的重组子菌落周围会形成透明圈。如果透明圈不明显，还可往培养板上喷碘，使淀粉所在区域呈蓝色本底，易于辨认。
2蛋白酶、脂肪酶等目的基因也可采用类似的方法进行鉴定

3抗菌素抗性基因的鉴定：
抗菌素抗性基因表达的蛋白质能使受体细胞产生对该抗生素的抗性。据此，只需往培养板中加入适量抗生素，理论上长出的菌落即是含有目的基因的目的重组子
在实际操作过程中，由于抗生素有时会诱导受体细胞产生抗性，因此必须从抗性重组克隆中抽出重组质粒，二次转化受体细胞。如果此时转化平板上出现大量的抗性菌落，即可认为这种抗性确由目的基因的编码产物产生

4DNA结合蛋白编码基因的鉴定：
用氯仿蒸汽或烈性噬菌体喷洒克隆平板
用聚乙烯薄膜影印裂解平板
轻轻漂洗影印薄膜，干燥固定
80℃烘干固定影印薄膜
与探针溶液中杂交
洗涤、干燥、感光
探针选用能与目标蛋白特异 性结合的DNA片段

杂交释放转译鉴定：无细胞体外翻译系统：麦胚提取物、网织红细胞提取物

5蛋白质生物结构鉴定法
放射免疫原位杂交鉴定：
用氯仿蒸汽或烈性噬菌体喷洒克隆平板用固定了特异性抗体的聚乙烯薄膜影印
裂解平板
轻轻漂洗影印薄膜，干燥固定
与I125标记的IgG保温洗涤、干燥、感光

6免疫沉淀鉴定：
在琼脂培养基中加入目标蛋白的特异性抗体
然后涂布转化液
经培养后，目的重组子菌落变会分泌出目标
蛋白，后者与特异性抗体发生免疫沉淀
反应，在菌落周围形成白色的圆斑
此法简便快速，但灵敏度低，抗体消耗量大

7外源基因产物检测
聚丙烯酰胺凝胶电泳法
如果待筛选鉴定的目标蛋白既不能测定生物活性，又无现成的抗体使用，则可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行粗略的筛选

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