如题所述
æç
§èç½çæåæ¹å¼æåå°±è¡äºãä¸è¬æäºæ¥éª¤é½æ¯ä¸åçï¼ç ´ç¢--离å¿--æå
æåçè¯çä½ è¦æåçèç½çæ§è´¨è¿è¡éæ©ãæçµæ³³ï¼çæï¼HPLCã
æåå纯å该èç½ï¼å¯ä»¥éç¨åè¶æ±è¿è¡å离ï¼ç¶åè¿è¡SDS-page,ç¡®å®ååé大å°ï¼è¿å¯ä»¥è¿è¡èç½æµåºãç¶åå¯ä»¥éè¿Xå è¡å°ç¡®å®èç½ç»æã
å ·ä½èç½è´¨çç©åè½æµå®æ³ä¸¾ä¾:
1æ·ç²é ¶ç®çåºå çé´å®ï¼
æ·ç²é ¶è½å°æ·ç²æ°´è§£ä¸ºå¤ç³æåç³ãå°é¾æº¶æ·ç²é ¶è½å°æ·ç²æ°´è§£ä¸ºå¤ç³æåç³ãå°é¾æº¶äºæ°´
çæ·ç²å å ¥åºä½å¹å »åºå ï¼å¹å »åºåæ··æµç¶ãå°å¾ é´å®çéç»å éæ¶å¸å¨æ¤å¹å »åºä¸ï¼å«ç®çåºå çç®çéç»åå¯å ¶è¡¨è¾¾çæ·ç²é ¶åæ³åºèå¤ï¼å¹¶ååæ©æ£ï¼åæ¶é解æ·ç²ä¸ºå¯æº¶æ§
çå¤ç³æåç³ãå æ¤ï¼ç®çéç»åèè½å¨å´ä¼å½¢æéæåãå¦æéæåä¸ææ¾ï¼è¿å¯å¾å¹å »æ¿ä¸å·ç¢ï¼ä½¿æ·ç²æå¨åºååèè²æ¬åºï¼æäºè¾¨è®¤ã
2èç½é ¶ãèèªé ¶çç®çåºå ä¹å¯éç¨ç±»ä¼¼çæ¹æ³è¿è¡é´å®
3æèç´ ææ§åºå çé´å®ï¼
æèç´ ææ§åºå 表达çèç½è´¨è½ä½¿åä½ç»è产ç对该æçç´ çææ§ãæ®æ¤ï¼åªéå¾å¹å »æ¿ä¸å å ¥ééæçç´ ï¼ç论ä¸é¿åºçèè½å³æ¯å«æç®çåºå çç®çéç»å
å¨å®é æä½è¿ç¨ä¸ï¼ç±äºæçç´ ææ¶ä¼è¯±å¯¼åä½ç»è产çææ§ï¼å æ¤å¿ é¡»ä»ææ§éç»å éä¸æ½åºéç»è´¨ç²ï¼äºæ¬¡è½¬ååä½ç»èãå¦ææ¤æ¶è½¬åå¹³æ¿ä¸åºç°å¤§éçææ§èè½ï¼å³å¯è®¤ä¸ºè¿ç§ææ§ç¡®ç±ç®çåºå çç¼ç 产ç©äº§ç
4DNAç»åèç½ç¼ç åºå çé´å®ï¼
ç¨æ°¯ä»¿è¸æ±½æçæ§å¬èä½å·æ´å éå¹³æ¿
ç¨èä¹ç¯èèå½±å°è£è§£å¹³æ¿
轻轻æ¼æ´å½±å°èèï¼å¹²ç¥åºå®
80âçå¹²åºå®å½±å°èè
ä¸æ¢é溶液ä¸æ交
æ´æ¶¤ãå¹²ç¥ãæå
æ¢ééç¨è½ä¸ç®æ èç½ç¹å¼ æ§ç»åçDNAç段
æ交éæ¾è½¬è¯é´å®ï¼æ ç»èä½å¤ç¿»è¯ç³»ç»ï¼éº¦èæåç©ãç½ç»çº¢ç»èæåç©
5èç½è´¨çç©ç»æé´å®æ³
æ¾å°å ç«åä½æ交é´å®ï¼
ç¨æ°¯ä»¿è¸æ±½æçæ§å¬èä½å·æ´å éå¹³æ¿ç¨åºå®äºç¹å¼æ§æä½çèä¹ç¯èèå½±å°
è£è§£å¹³æ¿
轻轻æ¼æ´å½±å°èèï¼å¹²ç¥åºå®
ä¸I125æ è®°çIgGä¿æ¸©æ´æ¶¤ãå¹²ç¥ãæå
6å ç«æ²æ·é´å®ï¼
å¨ç¼èå¹å »åºä¸å å ¥ç®æ èç½çç¹å¼æ§æä½
ç¶åæ¶å¸è½¬å液
ç»å¹å »åï¼ç®çéç»åèè½åä¼åæ³åºç®æ
èç½ï¼åè ä¸ç¹å¼æ§æä½åçå ç«æ²æ·
ååºï¼å¨èè½å¨å´å½¢æç½è²çåæ
æ¤æ³ç®ä¾¿å¿«éï¼ä½çµæ度ä½ï¼æä½æ¶èé大
7å¤æºåºå 产ç©æ£æµ
èä¸ç¯é °èºåè¶çµæ³³æ³
å¦æå¾ çéé´å®çç®æ èç½æ¢ä¸è½æµå®çç©æ´»æ§ï¼åæ ç°æçæä½ä½¿ç¨ï¼åå¯éç¨èä¸ç¯é °èºåè¶çµæ³³è¿è¡ç²ç¥ççé
æåçè¯çä½ è¦æåçèç½çæ§è´¨è¿è¡éæ©ãæçµæ³³ï¼çæï¼HPLCã
æåå纯å该èç½ï¼å¯ä»¥éç¨åè¶æ±è¿è¡å离ï¼ç¶åè¿è¡SDS-page,ç¡®å®ååé大å°ï¼è¿å¯ä»¥è¿è¡èç½æµåºãç¶åå¯ä»¥éè¿Xå è¡å°ç¡®å®èç½ç»æã
å ·ä½èç½è´¨çç©åè½æµå®æ³ä¸¾ä¾:
1æ·ç²é ¶ç®çåºå çé´å®ï¼
æ·ç²é ¶è½å°æ·ç²æ°´è§£ä¸ºå¤ç³æåç³ãå°é¾æº¶æ·ç²é ¶è½å°æ·ç²æ°´è§£ä¸ºå¤ç³æåç³ãå°é¾æº¶äºæ°´
çæ·ç²å å ¥åºä½å¹å »åºå ï¼å¹å »åºåæ··æµç¶ãå°å¾ é´å®çéç»å éæ¶å¸å¨æ¤å¹å »åºä¸ï¼å«ç®çåºå çç®çéç»åå¯å ¶è¡¨è¾¾çæ·ç²é ¶åæ³åºèå¤ï¼å¹¶ååæ©æ£ï¼åæ¶é解æ·ç²ä¸ºå¯æº¶æ§
çå¤ç³æåç³ãå æ¤ï¼ç®çéç»åèè½å¨å´ä¼å½¢æéæåãå¦æéæåä¸ææ¾ï¼è¿å¯å¾å¹å »æ¿ä¸å·ç¢ï¼ä½¿æ·ç²æå¨åºååèè²æ¬åºï¼æäºè¾¨è®¤ã
2èç½é ¶ãèèªé ¶çç®çåºå ä¹å¯éç¨ç±»ä¼¼çæ¹æ³è¿è¡é´å®
3æèç´ ææ§åºå çé´å®ï¼
æèç´ ææ§åºå 表达çèç½è´¨è½ä½¿åä½ç»è产ç对该æçç´ çææ§ãæ®æ¤ï¼åªéå¾å¹å »æ¿ä¸å å ¥ééæçç´ ï¼ç论ä¸é¿åºçèè½å³æ¯å«æç®çåºå çç®çéç»å
å¨å®é æä½è¿ç¨ä¸ï¼ç±äºæçç´ ææ¶ä¼è¯±å¯¼åä½ç»è产çææ§ï¼å æ¤å¿ é¡»ä»ææ§éç»å éä¸æ½åºéç»è´¨ç²ï¼äºæ¬¡è½¬ååä½ç»èãå¦ææ¤æ¶è½¬åå¹³æ¿ä¸åºç°å¤§éçææ§èè½ï¼å³å¯è®¤ä¸ºè¿ç§ææ§ç¡®ç±ç®çåºå çç¼ç 产ç©äº§ç
4DNAç»åèç½ç¼ç åºå çé´å®ï¼
ç¨æ°¯ä»¿è¸æ±½æçæ§å¬èä½å·æ´å éå¹³æ¿
ç¨èä¹ç¯èèå½±å°è£è§£å¹³æ¿
轻轻æ¼æ´å½±å°èèï¼å¹²ç¥åºå®
80âçå¹²åºå®å½±å°èè
ä¸æ¢é溶液ä¸æ交
æ´æ¶¤ãå¹²ç¥ãæå
æ¢ééç¨è½ä¸ç®æ èç½ç¹å¼ æ§ç»åçDNAç段
æ交éæ¾è½¬è¯é´å®ï¼æ ç»èä½å¤ç¿»è¯ç³»ç»ï¼éº¦èæåç©ãç½ç»çº¢ç»èæåç©
5èç½è´¨çç©ç»æé´å®æ³
æ¾å°å ç«åä½æ交é´å®ï¼
ç¨æ°¯ä»¿è¸æ±½æçæ§å¬èä½å·æ´å éå¹³æ¿ç¨åºå®äºç¹å¼æ§æä½çèä¹ç¯èèå½±å°
è£è§£å¹³æ¿
轻轻æ¼æ´å½±å°èèï¼å¹²ç¥åºå®
ä¸I125æ è®°çIgGä¿æ¸©æ´æ¶¤ãå¹²ç¥ãæå
6å ç«æ²æ·é´å®ï¼
å¨ç¼èå¹å »åºä¸å å ¥ç®æ èç½çç¹å¼æ§æä½
ç¶åæ¶å¸è½¬å液
ç»å¹å »åï¼ç®çéç»åèè½åä¼åæ³åºç®æ
èç½ï¼åè ä¸ç¹å¼æ§æä½åçå ç«æ²æ·
ååºï¼å¨èè½å¨å´å½¢æç½è²çåæ
æ¤æ³ç®ä¾¿å¿«éï¼ä½çµæ度ä½ï¼æä½æ¶èé大
7å¤æºåºå 产ç©æ£æµ
èä¸ç¯é °èºåè¶çµæ³³æ³
å¦æå¾ çéé´å®çç®æ èç½æ¢ä¸è½æµå®çç©æ´»æ§ï¼åæ ç°æçæä½ä½¿ç¨ï¼åå¯éç¨èä¸ç¯é °èºåè¶çµæ³³è¿è¡ç²ç¥ççé
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
第1个回答 2012-03-18
使用其他溶剂使其沉淀
第2个回答 2018-10-20
豌豆的可溶性蛋白提取:
液氮+叶片,研磨,使细胞破碎后,加入PBS缓冲液混匀,低温静置离心,取上清,加上样缓冲液,加热,点样,电泳
液氮+叶片,研磨,使细胞破碎后,加入PBS缓冲液混匀,低温静置离心,取上清,加上样缓冲液,加热,点样,电泳