如题所述
PET-32a的His tag分别在前面的trx蛋白C端以及你的目标蛋白C端,如果你的目的蛋白在构建载体的时候自己加了终止子,那么你的目的蛋白C端是没有His tag的,也就是说唯一一个his tag在trx与你的蛋白之间(PET32a是融合蛋白),这样,PET-32a提供的两个肽链内切酶(凝血酶和肠激酶)都是可以切掉的,当然,个人建议你用肠激酶,因为肠激酶酶切位点更贴近你的目的蛋白,而用凝血酶的话还有一个S tag。如果你在构建载体的时候,下游引物没有加终止子,那么你的蛋白的N端也会有一个His Tag,这时候你需要用TAGZyme了,这个酶专一性去除his tag的。追问
嗯,懂啦,太感谢啦!!!
追答采纳哦,感谢^^
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第1个回答 2012-03-12
6xHis标签可用一些酶,譬如TAGZyme去除追问
嗯,就是6xHis,我的载体是PET-32a我查的是凝血酶,你是用TAGZyme吗、
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