成功转化到大肠杆菌之后,却始终得不到有活性的胰岛素,为什么?
胰岛素在真核细胞中合成的过程,即分泌蛋白的合成和分泌过程,直接参与的细胞器有核糖体、内质网、高尔基体,特别是内质网和高尔基体对蛋白质进行加工,形成具有一定空间结构的蛋白质,从而体现出生物活性。而大肠杆菌是原核细胞,没有内质网、高尔基体等复杂的细胞器,所以即使成功转化到大肠杆菌的细胞内也不能合成有活性的胰岛素。
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第1个回答 2012-01-04
这正是E.coli表达体系的不足之处,它缺乏转录后的加工机制和适当的翻译加工机制。真核表达体系常见的有酵母、昆虫、哺乳类细胞等。重要的是将重组体导入细胞,即转染。常见转染方法:磷酸钙转染,DEAE葡萄糖介导转染,电穿孔、脂质体转染及纤维注射等。其次是转染后的细胞筛选,主要依赖特异性抗性标志。
第2个回答 2011-12-27
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