菌落PCR结果正确,为什么摇菌提质粒酶切不对?

双酶切,目的片段连接的是T载体(新的),菌落PCR做的20个 1个阴性对照,19个都有目的条带,阴性没有条带。

第1个回答  2017-05-12
通用引物加引物菌落PCR+质粒双酶切 均阳性 具特异性证明(缝拼接除外)
认双酶切实验能够更严谨验证重组实验 更具说服力基组测序
知道您重组质粒否酶切解环与线性空载体进行比 本身存定范围内误差 若目片段 立体琼脂糖凝胶误差放 能影响实验结
根据您实验结 我猜测重组质粒阴性能性更些
既已经抽提质粒 妨做质粒PCR双酶切 品块凝胶内平行跑

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