已找到同源基因,请说出大概步骤。
看来是要研究的物种没有测序咯
首先根据同源基因比对,然后在保守区域设计间并引物,先将保守区域克隆。然后根据保守区域设计基因特异引物,进行5’RACE及3’RACE,分别拿到保守区域两端的片断,然后序列拼接,拼出全长序列后,在基因两端设计一对引物将基因全长CDS克隆。
表达策略:1 反向遗传学:克隆的CDS可以亚克隆到特定的表达载体,并转基因到特定的物种(如果本物种的转基因体系尚未建立或很困难,可以先转入一些模式生物),按需要在各种启动子的驱动下在生物体内表达,观察表型;同时可以根据该CDS序列,设计RNAi载体,转基因,观察表型。如果需要,可以克隆该基因本身的启动子,然后让其驱动该基因或RNAi片断表达。
2 体外表达:可以利用大肠杆菌、酵母系统,在体外做一些原核或真核的表达。用以研究酶活,制备抗体等。
首先根据同源基因比对,然后在保守区域设计间并引物,先将保守区域克隆。然后根据保守区域设计基因特异引物,进行5’RACE及3’RACE,分别拿到保守区域两端的片断,然后序列拼接,拼出全长序列后,在基因两端设计一对引物将基因全长CDS克隆。
表达策略:1 反向遗传学:克隆的CDS可以亚克隆到特定的表达载体,并转基因到特定的物种(如果本物种的转基因体系尚未建立或很困难,可以先转入一些模式生物),按需要在各种启动子的驱动下在生物体内表达,观察表型;同时可以根据该CDS序列,设计RNAi载体,转基因,观察表型。如果需要,可以克隆该基因本身的启动子,然后让其驱动该基因或RNAi片断表达。
2 体外表达:可以利用大肠杆菌、酵母系统,在体外做一些原核或真核的表达。用以研究酶活,制备抗体等。
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
第1个回答 2010-03-29
如果找不到同源基因,就用图位克隆吧。