如题所述
胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，在世界范围内均具有较高的发病率和致死率。由于其病情发展较快, 早期检出率低, 出现症状后多为中晚期, 治疗效果往往较差，严重威胁人类健康。深入研究胃癌的发生发展机制，对指导胃癌的治疗有着十分重要的临床意义。
桩蛋白(Paxillin)是近年来发现的一种重要的细胞黏附因子,是致瘤性酪氨酸激酶的一种底物,与整合素相关联，构成细胞与细胞外基质局部黏附关键部位,调节细胞的移动和播散等功能,从而提高肿瘤细胞转移和侵袭的能力。
血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor , VEGF)是一种很强的促血管生成因子,是一种高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素，是一种糖基化分泌性多肽因子，可以促进肿瘤组织中新生血管的形成,从而有利于肿瘤的生长及进展。为了解Paxillin和VEGF在结胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征之间的关系,我们采用免疫组化法对胃癌组织中Paxillin和VEGF蛋白表达水平进行检测,并探讨它们与胃癌生物学行为的关系。
1、材料和方法
1.1材料 收集山西医科大学第一临床医学院2009-01~2009-07期间手术切除胃癌标本55例。其中男38例，女17例，男女比例2.24：1;年龄39～81岁，平均年龄63.56±10.58岁;病理分级：腺癌49例，印戒细胞癌6例;低分化38例，中分化11例，高分化6例;PTNM分期(国际 UICC1997分期标准)：I期10例、II期13例、III期16例、IV期16例。
以上病例术前均未作放疗、化疗等抗肿瘤治疗。从以上55例胃癌患者的胃正常切缘组织中随机抽取20例作为对照组。所有标本均经病理证实，用10(中性)甲醛(固定)，(石蜡)包埋，4μm厚切片。
1.2 方法 采用免疫组织化学二步法染色，第一抗体Paxillin、VEGF购自福州迈新生物技术开发有限公司;P-V6000二步法免疫组化检测试剂、浓缩型DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。切片进行高温高压组织抗原修复。染色步骤按试剂盒说明书进行。用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断 Paxillin、VEGF阳性表达为细胞质中出现棕黄色颗粒状物质。每张切片5个具有代表性的高倍视野，每个视野计数100个细胞，将阳性细胞的百分率和染色强度分别计分。具体判断标准如下：
(1)根据染色程度进行评分：无染色为0分，染色强度弱者(淡黄色或仅个别细胞呈黄至棕黄色染色)为1分，染色强度强者(呈黄至棕黄色染色)为3分，中等染色强度者(染色强度介于前两者之间)为2分;
(2)根据着色细胞百分率进行评分：着色细胞占计数细胞百分率5为0分，5～25为1分，26～50为2分，51～75为3分，75为4分。(1)+(2)为总积分，总分为0～7分。得0分为阴性(-)，得1～2分为弱阳性(+)，得3～5分为阳性(++)，得6～7分为强阳性(+++)。
1.4统计所有数据均采用SPSS17.0统计软件包进行分析。定性资料比较采用χ2检验、Fisher确切概率法。
2、结果
2.1 胃癌组织及正常切缘组织中Paxillin的表达
Paxillin蛋白的阳性表达为细胞质中出现黄色颗粒状物质，主要定位于细胞质中。在55例胃癌组织中有37例为阳性，阳性率为67.27，其中强阳性5例，阳性13例，弱阳性19例，18例为阴性。在20例正常胃切缘组织中，有4例阳性表达，其中强阳性1例，阳性1例，弱阳性2例，阳性率20.00。胃癌组织中Paxillin蛋白的表达明显高于正常切缘组，差异具有显著性(P0.01)。
2.2 胃癌组织及正常切缘组织中VEGF的表达
VEGF的阳性表达为细胞质中出现黄色颗粒状物质，主要定位于细胞质中。在55例胃癌组织中有40例为阳性，阳性率为72.72，其中强阳性5例，阳性13例，弱阳性22例，15例为阴性。在20例正常胃切缘组织中，有7例阳性表达，其中强阳性1例，阳性2例，弱阳性4例，阳性率35.00。胃癌组织中VEGF的表达明显高于正常切缘组，差异具有显著性(P0.01)。
2.3 Paxillin蛋白的表达与临床特征和病理参数的关系
Paxillin阳性表达与肿瘤大小、组织分化程度、胃癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关，各组间对比差异均有显著性(P0.05),而与性别、年龄无关。VEGF阳性表达与组织分化程度、胃癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关，各组间对比差异均有显著性(P0.05),而与性别、年龄和肿瘤大小无关。
3、讨论
细胞黏附与肿瘤的关系是近年来生命科学研究的热门课题之一。恶性肿瘤的发生发展和转移不仅是组织细胞的异常增殖，细胞-细胞、细胞-基质之间的特异黏附和细胞迁移过程异常也是其另一重要原因。Paxillin是近年来发现的一种信号衔接蛋白(signal adaptor protein)，相对分子质量为68×103, 主要存在于黏附斑，构成细胞与细胞外基质局部黏附的关键部位,同时也是细胞信号传导的重要位点。
在整合素激活早期,出现几种整合素联合蛋白的酪氨酸磷酸化,其中包括Paxillin。研究表明，Paxillin有参与动态调节粘着斑、调节细胞的移动和播散等功能，由于肿瘤的浸润转移与细胞的黏附力、移动力的改变直接相关，所以Paxillin与肿瘤细胞的浸润和转移必然存在着一定的联系。
有相关研究报道：paxillin在胃中、低分化腺癌组织中的表达显著高于高分化腺癌，进展期胃癌组织中显著高于早期胃癌，胃癌原发灶中显著高于淋巴结转移灶。Paxillin在食管癌组织中显著增高，且与临床分期和淋巴结转移有关。Paxillin在大肠癌中也有高表达,且与癌组织浸润肠壁深度和淋巴结转移密切相关。
在肝细胞癌患者中paxillin 的阳性率在低分化组高于高分化组，伴有门静脉癌栓形成组高于无癌栓形成组，伴有肝外转移组高于无肝外转移组;在肺癌组织中，Paxillin 呈阳性表达的超过半数发生淋巴结转移，而paxillin 呈阴性的肺癌发生淋巴结转移者不到1/5。可见Paxillin的表达很有可能与胃癌发生发展和转移有关，可以作为预示肿瘤浸润转移和患者预后不良的指标。
本次实验研究显示:Paxillin蛋白在胃癌组织中高表达与正常胃切缘组织对比差异有显著性(P0.01)。Paxillin阳性表达与肿瘤大小、组织分化程度、胃癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关，各组间对比差异均有显著性(P0.05)。由此可见，Paxillin参与了胃癌的发生和发展，是胃癌预后不良的影响因子。
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)亦称血管通透因子(vascular permeability factor,VPF)，是一种特异地作用于血管内皮细胞的生长因子。近年来VEGF与恶性肿瘤的关系受到重视，并开展了较多研究，发现恶性肿瘤组织VEGF表达上调，能促进肿瘤血管形成，是肿瘤产生、发展和转移过程中极为关键的步骤。
丰富的肿瘤新生血管，一方面输送氧气、营养、转运代谢产物满足肿瘤组织无限生长的需要;另一方面，新生血管基底膜不完整及血管通透性的提高，也为肿瘤的浸润、转移提供便利条件。
有研究表明：VEGF基因在胃癌组织中有较高的表达, 且与肿瘤的浸润深度、临床分期及淋巴转移具有显著的相关性。本实验示：VEGF在胃癌组织中呈过度表达状态，与正常胃切缘组织的表达有显著差异，提示它参与了胃癌的发生和发展。VEGF在胃癌组织中的表达与组织分化程度、胃癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关，提示它是一种胃癌预后不良的影响因子。
综上所述，Paxillin和VEGF参与了胃癌的发生和发展，是胃癌预后不良的影响因子。并且两者的表达均与组织分化程度、胃癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移密切相关，提示联合检测Paxillin和VEGF在胃癌组织中的表达，比单一指标更能够准确的判断预后。在有区域淋巴结转移的病例中，Paxillin和VEGF阳性表达率明显增高，暗示胃癌区域淋巴结转移的危险性增高，对于胃癌手术的根治范围和术后化疗有一定的指导意义。
此外，Paxillin和VEGF在胃癌的发生发展中有相互作用。VEGF通过使Paxillin的酪氨酸磷酰化，进而增强paxillin的表达，促进肿瘤细胞的迁移和浸润，靶向Paxillin的治疗既可以阻止肿瘤的发生、发展，又可抑制肿瘤的血管生成并增加肿瘤对化疗药物的敏感性，有望成为抗肿瘤治疗的重要靶点。
