请问大肠杆菌培养基如何制作？我是一个初一学生，爱好生物，今年14岁。想培养多种细菌
培养基的基本成分
一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等（具体见教材15页“100ml牛肉蛋白胨培养基的营养构”）。
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方（即计算）
物质
牛肉膏
蛋白胨
nacl
琼脂
水
重量
5g
10g
5g
20g
定溶至1000ml
2.称量
按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。
3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至100ml。
4.灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。
5.倒平板：待培养基冷却到50oc左右时倒平板（如教材17图示）。
（二）纯化大肠杆菌
微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。
1.平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。
2.稀释涂布平板法
（1）将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释
度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行
培养。
（2）在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物
将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单
个的菌落。
（3）稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，
即系列稀释操作和涂布平板操作。
系列稀释操作
(1)将分别盛有9ml水的试管灭菌并编号。
(2)用移液管吸取1ml培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。
(3)从101倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。
涂布平板操作
(1)将涂布器浸在盛有70％的酒精的烧杯中。
(2)取少量菌液（不超0.1ml），滴加到培养基表面。
(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却
8～10s。
(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
3.培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？
培养12
h与24
h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。
一般的培养基均需要碳源、氮源、无机盐和水等（具体见教材15页“100ml牛肉蛋白胨培养基的营养构”）。
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.牛肉膏蛋白胨固体培养基配方（即计算）
物质
牛肉膏
蛋白胨
nacl
琼脂
水
重量
5g
10g
5g
20g
定溶至1000ml
2.称量
按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。
3.溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至100ml。
4.灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮纸），连同培养皿（3～5套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。
5.倒平板：待培养基冷却到50oc左右时倒平板（如教材17图示）。
（二）纯化大肠杆菌
微生物接种方法常见的有平板划线法和稀释涂布平板法。
1.平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面
在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称菌落。
2.稀释涂布平板法
（1）将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释
度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行
培养。
（2）在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物
将分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单
个的菌落。
（3）稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，
即系列稀释操作和涂布平板操作。
系列稀释操作
(1)将分别盛有9ml水的试管灭菌并编号。
(2)用移液管吸取1ml培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。
(3)从101倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入第三支试管中，重复步骤2，直至到第六支试管。
涂布平板操作
(1)将涂布器浸在盛有70％的酒精的烧杯中。
(2)取少量菌液（不超0.1ml），滴加到培养基表面。
(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷却
8～10s。
(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
3.培养12h和24h后，观察到的实验结果相同吗？如果不同，请分析产生差异的原因？
培养12
h与24
h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。随着时间的延长、菌落的不断生长，使菌落不断增大。
温馨提示：答案为网友推荐，仅供参考
第1个回答 推荐于2017-04-15
一般大肠杆菌都使用LB 培养基，
其成分如下：
胰化蛋白胨 10g/L
酵母提取物 5g/L
NaCl 10g/L
如果是固体的培养基，就需要再加入15克琼脂粉
pH 7.4~7.6
实验室里，配好之后就去灭菌锅里灭菌就好了。
看看另外一个网友的相似的答案，希望对你有启发:)
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。本回答被提问者采纳
其成分如下：
胰化蛋白胨 10g/L
酵母提取物 5g/L
NaCl 10g/L
如果是固体的培养基，就需要再加入15克琼脂粉
pH 7.4~7.6
实验室里，配好之后就去灭菌锅里灭菌就好了。
看看另外一个网友的相似的答案，希望对你有启发:)
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。本回答被提问者采纳
第2个回答 2017-06-10
用法
称取本品 50.1g 加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，36±1℃倒置培养18～24h。或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h
操作步骤
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液
2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃显色培养基中混匀或涂布于平板上
3、36±1℃培养18～24h，选用有30～200个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠杆菌=蓝绿色菌落
4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装20支x3种)
大肠杆菌培养基一般指大肠杆菌显色培养基
大肠杆菌显色培养基是改良的优质快速检测培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌的快速检测。
注意
1.此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
2.此培养基仅供实验室使用。
贮存：
制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处， 保存温度2-8℃，注意避光保存。
失效：
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
典型菌落特征：
大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，大肠菌群为无色菌落，其它细菌为无色或黄色菌落。
称取本品 50.1g 加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，36±1℃倒置培养18～24h。或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h
操作步骤
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液
2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃显色培养基中混匀或涂布于平板上
3、36±1℃培养18～24h，选用有30～200个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠杆菌=蓝绿色菌落
4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装20支x3种)
大肠杆菌培养基一般指大肠杆菌显色培养基
大肠杆菌显色培养基是改良的优质快速检测培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌的快速检测。
注意
1.此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
2.此培养基仅供实验室使用。
贮存：
制备好的平板应立即使用，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处， 保存温度2-8℃，注意避光保存。
失效：
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
典型菌落特征：
大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，大肠菌群为无色菌落，其它细菌为无色或黄色菌落。
第3个回答 2017-06-10
大肠杆菌显色培养基是海博生物改良的优质快速检测培养基，用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌的快速检测。大肠杆菌显蓝绿色，大肠菌群显无色，其它菌显黄色或无色，革兰氏阳性菌被抑制。
用法
称取本品 50.1g 加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，36±1℃倒置培养18～24h。或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h。
操作步骤
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液
2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃显色培养基中混匀或涂布于平板上
3、36±1℃培养18～24h，选用有30～200个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠杆菌=蓝绿色菌落
4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装20支x3种)
用法
称取本品 50.1g 加入1000ml蒸馏水，加热溶解并不停搅拌，煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心，倾入冷却至45-50℃培养基约15ml，混匀，凝固后，36±1℃倒置培养18～24h。或冷却至45-50℃时，倾入无菌平皿，琼脂完全凝固后，在37℃的培养箱中倒置放置1-2小时，加入适当稀释度的样品液1ml，涂布于培养基上，36±1℃培养18～24h。
操作步骤
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液
2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃显色培养基中混匀或涂布于平板上
3、36±1℃培养18～24h，选用有30～200个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝绿色，其它细菌为无色或黄色菌落。
总大肠杆菌=蓝绿色菌落
4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上，36±1℃培养12-16小时，挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装20支x3种)
第4个回答 2010-06-25
这样吧，你可以有普通营养培养基，或麦康凯培养基，这些东西自己配起来比较麻烦，而且原料的采集也是一个麻烦事，但是现在市面上有给你配好的现呈货，用起来很方便，我们实验室都是这样用的，都不自己配，你买起来按上面的说明进行使用就行了，
