如题所述
Nus tag标签长约60多个kD,在与墓地蛋白共表达时很容易形成可溶性表达,这是这个载体的优点,但是其标签太大,对功能试验是非常不利的,因为它可能会将你的目的蛋白包围,或者对目的蛋白的抗原位点形成空间位阻,使其不能充分与抗体结合,从而影响ELISA试验结果,所以你在做ELISA实验之前应该将空载体做表达,纯化出标签蛋白,标签蛋白和重组蛋白同时做ELISA,如果重组蛋白称阳性反应,而标签蛋白称阴性反应,你就不用切除标签了,但是如果标签蛋白和抗体也能反应,或者重组蛋白和抗体没有反应,那么你就需要切除标签了,这个标签切除工作不是很可行,首先是工作量大,其次是因为目的蛋白是在标签的作用下才形成可溶性的,如果切除了标签,你的目的蛋白可能也就变成了不溶性沉淀了,我切过几次,但是结果都没有切开,不过我见过有人切成功的,你可以试一试。追问
明白了谢谢啊。
再另外问你一个问题:在看质粒图谱时,抗性基因可启动子的方向往往相反,说是可以降低本底表达,什么是本底表达啊,为什么方向相反就能抑制本底表达呢? 麻烦了
本底表达指与外源基因表达产物相同的宿主自身基因的表达,在检测外源基因的表达量时应扣除本底表达。
减少本底表达就是为了方便目的蛋白的纯化,尽量做到后续纯化步骤简捷,同时也为了得到更高目的蛋白的表达,因为本底表达过高会造成目的蛋白表达的减少
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