如题所述
一、需要做实验确定,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度。
二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导。
三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋白表达达到最高值,最后收菌后,加上以前的取得样品跑SDS-PAGE胶检验蛋白表达。
四、如果是酶的话就可以测定酶活确定,再跑SDS-PAGE胶检验溶解蛋白和包涵体的差异。
扩展资料:
IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。
基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时。
如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。
此外,它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。
E.coli的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、渗透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I。
I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激 活蛋白(CAP)结合位点。
由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。
参考资料来源:百度百科——IPTG
一般正常的选择是0.5mM IPTG来诱导
如果需要优化诱导表达条件,可以平行尝试从0.1mM~1mM之间各个浓度IPTG诱导。寻找最合适的条件来诱导表达。本回答被提问者和网友采纳