图中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图甲、图乙中箭头表示相关限制酶的酶切位点．下列叙述正确的是（ ）A．用质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma I切割B．图甲所示的质粒分子在经Sma I酶切割后含有4个游离的磷酸基团C．为获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入DNA聚合酶D．用EcoR I、HindⅢ和BamH I中的任意一种酶切割质粒和外源基因都可以
A、基因表达载体必须具备目的基因、启动子、终止子、标记基因，图中质粒的标记基因为抗生素抗性基因，而Sma I的切割位点就在该基因上，因此用质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma I切割，故A正确；
B、质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团．从图甲可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被该酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团，故B错误；
C、质粒和目的基因连接后获得重组质粒，该过程需要连接酶作用，故混合后加入DNA连接酶，故C错误；
D、只使用EcoR I，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用连接酶连接时，会产生质粒和目的基因自身连接物，而利用BamHⅠ和HindⅢ剪切时，在目的基因上只有一个酶切位点，因此不能切割目的基因，故D错误．
故选A．
B、质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团．从图甲可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被该酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团，故B错误；
C、质粒和目的基因连接后获得重组质粒，该过程需要连接酶作用，故混合后加入DNA连接酶，故C错误；
D、只使用EcoR I，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用连接酶连接时，会产生质粒和目的基因自身连接物，而利用BamHⅠ和HindⅢ剪切时，在目的基因上只有一个酶切位点，因此不能切割目的基因，故D错误．
故选A．
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