如题所述
以前可以的，现在不行就说明一定是现在的工艺流程和以前的相比出现了变化。这个可能出现变化的地方很多，从诱导表达开始就有改变的可能，最容易出问题的主要是复性时包括纯化时的温度，复性液的配方，使用的层析柱填料等等。需要针对每一个细节作比较，找出和以前不一样的地方再分析。追问
用了2月份发酵的包涵体做，其得率和和比活都正常，但是从5月中旬到现在发酵的怎么做得率都非常低，连变种也无法复性出活力来，发酵是另外一个人做的，他说发酵的工艺和以前一样，但是目前就是一直在找原因，重新配试剂 用NAOH洗容器什么的但还是没有解决问题，真的是很头疼啊。
追答发酵的怎么做得率都非常低可能是菌种的问题了，也许试试可以把质粒抽提出来重新转化宿主菌。
另外就是现在操作时的温度是否和2月份时候一致，这么久了各种试剂应该会换成新的批次了，需要核对下各种试剂是否和以前用的一样，也许一个细节的改变就会造成结果的改变。
包涵体没有破碎好会导致后面的复性纯化出的蛋白没有活力 得率低吗？
追答当然有可能，包涵体复性是一个重新折叠的过程，折叠前自然是要将之前错搭的结构完全展开成一级结构。如果包涵体破碎处理不是很好的话，理论上是有可能造成一级结构上有些键还是处于错搭的状态。最终就是影响到整个结构的重新折叠进而影响到活性。
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