用SDS凝胶电泳,我的目的蛋白是22.35 kDa,用的是GST标签,GST大概有26kDa,理论上结合后的蛋白在48kDa左右,可跑出来的是在45kDa,这个是什么原因
有可能是你的操作有问题。还有就是实验都有误差,看你这个是不是在误差范围内。你的设备器材上的问题考虑过没有?
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第1个回答 2009-08-08
设计载体之前考虑密码子偏好性了没?
原核和真核表达系统都有自己的偏好性,
这你得看看,有可能是读断了,不过也不好说。要不在看看有没有不留神整个终止子再里面,实在实在实在不行就测活性了,
还有楼上说的分解,应该不太可能,降解了跑的胶是弥散状,
实验误差估计也有点玄,相信你应该跑过好几次胶了,三次都是的话就是实验上本身的问题了,建议先分析一下序列,从源头看。
如果要是原核表达的话,建议换个菌株,pET系统的gami系列有弥补西游密码子的。
原核和真核表达系统都有自己的偏好性,
这你得看看,有可能是读断了,不过也不好说。要不在看看有没有不留神整个终止子再里面,实在实在实在不行就测活性了,
还有楼上说的分解,应该不太可能,降解了跑的胶是弥散状,
实验误差估计也有点玄,相信你应该跑过好几次胶了,三次都是的话就是实验上本身的问题了,建议先分析一下序列,从源头看。
如果要是原核表达的话,建议换个菌株,pET系统的gami系列有弥补西游密码子的。
第2个回答 2009-08-07
是否检验过样品的处理效果,存不存在样品分解的可能。