如题所述
zhou0958求助:是否瞬转成功的检测
我现在想做瞬转,然后24,48,72小时后检测转染的载体对细胞增殖的影响.我所转染的是连有目的片段的PCDNA3.1载体,这种载体是不带荧光的.请问各位大侠,我该用什么方法来检测我的转染是否成功呢?
DXY721认为
检测转染成功与否的方法很多,流式,RT-PCR,WB应该都可以
eastICEbird建议
是不是可以和有荧光的一起转染,做个对照呢
他们有经验的师姐说,转染成功的细胞,状态会变差,变差的可能就转进去了
普通学生建议
可以先使用有荧光蛋白的空载体验证整个系统的转染效率,用流式检测就可以了,非常方便。确定转染效率没有问题后可以转染带有目的基因的质粒。
对于转染效果的验证主要取决于你的目的蛋白的性质。主要是mRNA和蛋白水平的验证。mRNA水平可以使用普通PCR或者定量PCR,前者是定性,后者定量。但是最主要的还是蛋白水平的检测,如果是膜蛋白,那么流式检测最方便,如果是胞外分泌型那么可以用上清做ELISA或者western都可以,如果是胞浆分泌型的那么就用Western或者流式都可以。
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第1个回答 2017-08-18
siRNA在细胞内是有一定时限的,因为RNA都有半衰期且不能进行复制扩增。在细胞增殖后,细胞内的siRNA不但会相对减少,还会被细胞降解掉。所以你最好在转染后24-72小时内进行实验。细胞增殖特别快的话,就接近于24小时收,细胞增殖慢的话,就可以稍微晚点收。
第2个回答 2018-09-25
最好在转染后24-72小时内进行实验,可以使用转染试剂,RFect小核酸转染试剂我们用下来实验效果挺好的,操作也方便。你可以试试。