如题所述
病毒名称:花生丛生辅助病毒Groundnut rosette assistor virus(GRAV)。
分类地位:未定属,黄症病毒科Luteoviridae。在国际病毒分类委员会(ICTV)中的编码为00.039.0.00.010。
病毒提纯:Rajeshwari&Murant(1988)提出以下提纯步骤:嫁接接种花生15~20d后,ELISA检测病株合格,采收病株地上部,100g病组织,加液态氮研磨成粉,加400ml60mmol/L(pH8.0)磷酸盐缓冲液(含10mmol/L乙二胺四醋酸钠disodiumEDTA和0.5%(V/V)ofa90%硫代丙三醇液thioglycerol solution),提取液调至pH6.8,加5%(V/V)Celluclast(一种工业用纤维素酶),于20℃搅2h,酶消化后,两层纱布过滤,滤液加一半量的1∶1正-丁醇和氯仿混合液,摇荡,使充分混匀,13000g离心10min,留水相,按80g/L加PEG(分子质量6000u)和0.2mol/LNaCl,混合,置4℃1.5h,再13000g离心20min,留沉淀,悬浮在40ml6mmol/L(pH7.2)磷酸盐缓冲液,于4℃摇沉淀过夜,13000g离心10min,留上清液,加1%(V/V)Triton X-100,在Beckman50.2Ti转子离心管中,每管先放7ml200g/L浓度的蔗糖垫(用磷酸盐缓冲液配制,缓冲液含80g/LPEG和0.2mol/LNaCl),上铺18ml上请液,进行蔗糖垫离心,50000r/min,离心2h,沉淀悬浮于16ml磷酸盐缓冲液,于4℃1h,再13000g离心10min,去除不溶物,最后,在磷酸盐缓冲液中,经三遍蔗糖密度梯度离心提纯病毒,若前两遍病毒层被寄主物质遮盖的话,就要用ELISA检测,将含病毒的节分,经250000g离心1h,沉淀悬浮在0.5ml磷酸盐缓冲液,即为提纯制剂。提纯产量约0.5~1.0mg/kg病组织。马铃薯卷叶病毒的单克隆抗体(Rajeshwari et al.,1987),用TAS-ELISA法能捕获GRAV。
病毒理化特性:
①病毒粒子:球状直径28nm,单一沉降组分,沉降系数115S,A260/A280为1.86。在硫酸铯中浮力密度1.34。
②核酸:单链RNA,单分体,总基因组大小为6.9kb,分子质量2.09*106u。
③蛋白:一种蛋白,分子质量24500u。
其他:在花生原产地南美没有花生丛生病,除非洲以外,世界各花生产地都无此病,所以,病原必定自然感染某些非洲的本土植物,但是,至今未发现,病毒可能存活在花生的自生株上(Storey&Bottomley,1928)。